最近在在做柱前衍生超高效液相色谱分离20种氨基酸，但亮氨酸与异亮氨酸老分不开???

如果是两个氨基酸的保留时间距离太近，那么只能调整液相条件了。比如调整流动相回比例，或者是梯答度比例，把两个氨基酸拉开。
也可以适当调整衍生程序。虽然衍生程序不会对氨基酸的保留时间有影响，不过会对它的信号产生影响。如果这两种氨基酸的峰高有所下降，或许分离度也可以达到要求。

还有就是注意峰型。衍生化程序很容易损坏色谱柱，超高效色谱的压力又高，色谱柱很容易损毁。如果峰型不好，建议用纯乙腈低流速反冲色谱柱。或者是更换新色谱柱。