请教免疫荧光双标中荧光二抗的选择是否合适？

最近要做免疫荧光双标实验，双标效果不理想，求指点：两种一抗分别是山羊多抗和小鼠单抗，荧光二抗选择了兔抗山羊和山羊抗小鼠，这两种荧光二抗可以一起用吗？因为单标两种效果挺好的跟文献一样，双标时有一种（山羊源性，标记胞浆蛋白）一直做不好。

网友 1

最佳答案

回答者：网友

一般来说，选择合适的二抗需要从下面几个方面考虑：1.二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源; 2.二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。这通常是针对单克隆抗体而言。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白，因此相应的二抗就是抗IgG抗体; 3.一般来说，不同的种属来源与二抗的质量没有必然的联系，来源于山羊的二抗与来源于驴的二抗在一般的实验里没有太多的差别。然而在一些特殊的实验里，如双标实验里，如果其中一个一抗是山羊来源的，一个是小鼠来源的，则相应的二抗分别要抗山羊和抗小鼠的二抗，这时候，二抗就不能选择山羊或者小鼠来源的。