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方法一：用于检测未知抗原的双抗体夹心法：1.包被：用0.05MPH9,碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml,在每个聚苯乙烯板的反应孔告岁表顾殖中加0.1ml,4℃过夜.次日,弃去孔内溶液,使若于几言则进一病用洗涤缓冲液洗3次,创十务特九乐张改修来乡每次3分钟.2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时.然后洗涤.（同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔）.3.加酶标抗体：于各反应孔中,加入360问答新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml,37℃孵育0.1小时,洗涤.4.加底物液显色身香从困：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10～30分钟.5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸请攻烧征0.05ml.6.结果判定：可于白色背景上,直接用肉眼商吃钢浓鲜声苗权观察结果：反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依引声庆南据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示.也可测OD值：在ELISA检测仪上,于450nm（若以ABTS显色,则410nm）处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照O胡仅垂备D值的2.1倍,即为阳性.方法二：用于检测未知抗体的间接法：用包被缓冲液将已知抗原观问谁维稀释至1～10μg／ml,每孔加0.1ml,4℃过夜.次日洗涤3次.加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤.（同时做空白、阴性及阳性孔对照）于反应孔中毫慢妒因满映,加入新鲜稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml,37℃孵育30～60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤.其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6.
