平滑肌肌浆球蛋白并不像骨骼肌中步安愿好的肌浆球蛋白。它只在它的轻链磷酸化后才与肌动蛋白相互作用。磷酸化过程由胞来自内Ca2+浓度的变...

平滑肌肌浆球蛋白并不像骨骼肌中的肌浆球蛋白。它只在它的轻链磷酸化后才与肌动蛋白相互作用。磷酸化过程由胞内Ca2+浓度的变化来控制，而Ca2+又是由钙调素(CaM)介导的。你已从平滑肌中纯化出肌浆球蛋白轻链激酶。但此激酶在有或无Ca2+存在时活性是一样的。你也可以加入蛋白酶抑制剂来保证纯化过程中激酶的完整性。在此条件下抽提物中的激酶元活性，除非有Ca2+存在。 表14-3-14 蛋白酶抑制剂对纯化肌动蛋白轻链激酶活力的影响 纯化表格 加入的试剂混合物 相对活力 负型抑制剂 没有 50 负型抑制剂 Ca2+ 50 负型抑制剂 钙调素 50 负型抑制剂 Ca2+/钙调素 50 正型抑制剂 没有 1 正型抑制剂 Ca2+ 1 正型抑制剂 钙调素 1 正型抑制剂 Ca2+/钙调素 100 通过凝胶过滤和离子交换层析部分地纯化激酶，接着在Ca2+存在下通过钙调素亲和柱。使人高兴的是，所有有活性的激酶均粘在柱子上，并且当用Ca2+螯合剂EDTA洗脱时能定量地洗脱下来。根据表14-3-14所示，纯化酶现在像所希望的那样，这表明了酶绝对依赖于Ca2+/钙调素。在此基础上，你可直接通过钙调素亲和柱挽救最初纯化的酶样品。令人惊奇的是激酶直接通过柱子，不论Ca2+存在与否。