核酸探针的核酸杂交

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杂交技术有固相杂交和液相杂交之分。固相杂交技术较为常用,先将待测核酸结合到一定的固相支持物上,物他东果说据轻鲁第再与液相中的标记探针进行杂交。固相支持物常用硝酸纤维素膜(nitroc举斤ellulose filter membrane,简称NC膜)或x龙膜(nylon membrane)。
固相杂交包括膜上印迹杂交和原位杂交。前者包括三个基本过程:第顺在线地注敌一,通过印迹技术将核酸片段转移到固相支持物上;第二,用标记探针与支持物上的核酸片段进行杂交;第三,杂交信号的检测。
用探针对细胞或组织切片中的核酸杂交并进行检测的方法定呢建似难界极初担明称之为核酸原位杂交。某特点是靶分子固定在细胞中,细胞固定在载玻片上,以固定的细胞代替纯化的核酸,然后将载玻片浸入溶有探针的溶液里,探针进入组织细胞与靶分子杂交,而靶分子仍固定在细胞内。例如。可用特来自异性的细菌、病毒的核酸做为探针对组织、细胞进行原位杂交,以确定有无该病原体的感染等。原位杂交不需从组织中提取核酸,对于组织中含量极低的靶序列有极高的敏感性,在临床应用上有独特的意义。
近年来液相杂交技术有所发展。液相杂交与固相杂交的主要区别是不用纯化或固定的靶分子,探针与靶序列直接在溶液里作用。液相杂交步骤有所简化,杂交速度有所提高,增加了特异性和敏感性,但与临床诊断所要求的特异性和敏感性还有一定的距离。
各种杂交技术中,膜上印迹杂交技术应用最为广泛,它由以下三个基本过程组成。


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