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为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上，送去测序总是少了一截呢，每次都是少了下游引物的那一截

缺失的片段大小还不一样，这个基因我用引物扩下来的时候是正常的。连到T载体，测序就总是少了一截
网友 1

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回答者：网友
请检查以下几点
1.PCR扩增的延伸时间是否足够
2.连接前回收片段是否是目的片段
3.克隆后是否进行菌液PCR鉴定大小符合目的片段
4.测序是否采用双向测序
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