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SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western印迹技术
SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳
技术首先在1967年由Shapiro等
建立，主要用于测定蛋白质亚基分子量。Weste
rn印迹是在SDS聚丙烯酰胺凝胶电
泳基础上，将电泳分离的蛋白组分从凝胶转移至一种
来自固相支持物上，应用抗体可与附
360问答着于固相支持物上的靶蛋白发生特异性反应的特点，针对特定
附甚松蛋白进行鉴别和定量。
原
理1．SDS聚丙烯酰胺凝
胶电泳SDS是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶剂，它能断
着宁合带延随略据老裂分子内和分子间的氢键，使
分子去折叠，破坏蛋白质分子的二级和三级结构。强还原剂，例如巯基
乙醇和二硫苏糖醇则能使半胱氨酸残基之间的二硫
含键断裂。在样品和凝
让称树胶中加入SDS和还原剂后，蛋白
目督呀圆哪宁建绿得严质分子被解聚，使其氨基酸侧链与SDS充分结合形成带负电荷的蛋白质-SDS胶束，所带的负电荷大大超过了蛋白质分子原有的电荷量，这就消除了不同分子之间原有的电荷差异。在水溶液中蛋白质-SDS胶束的长度与亚基分子量的大小成正比。因此这种胶束在SDS
查缺斤聚丙烯酰胺凝胶系统中
的电泳迁移率不再受蛋白质原有电荷的影响，而主要取决于蛋
白质或亚基分子量的大小。当蛋白质的分子量在15KD～200KD之间时，电泳迁移率与分子量
张的对数呈线性关系。由此可见，SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳不仅可以分离蛋白
质，而且可以根据迁移率大小测定蛋白质亚基的分子量。1.1单
介字动板去污剂裂解缓冲液
损名放举据：0.15mol/
发素此L NaCl 1ml水
