在42℃的温度时,大肠杆菌出现热休克,质粒可通过大肠杆菌细胞膜上形成的空隙进激腊裤入菌体内。
大肠杆菌的转化原理及方法 360问答:
大肠杆菌转化可以:(1)将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制,增殖和表达,以获得目的基因;(2源护即染候始屋)验证大肠杆菌感受态细胞因镇居台降菜止同算效果;(3)用于分子生物学其他研究。
实验方法原理:质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面,经过4课建设盟观补2°C短时间的热击处理,促进吸收DNA.然后在非选择培养基中培养一代,待质粒上所带的抗菌素基传刘因表达,就局如可以在含抗菌素的培养基中生长。
实论求站x抗验步骤
一、实验材料准备
1. 器材
旋涡混合器,微量移液取样器,移液器吸头,1.5 ml 微量离心管,双面微量离心管架,干式恒温气浴(或恒温水浴锅),制冰机,恒温摇床,培养皿(已铺好固体LB-Amp),超净工作台,酒精灯,属玻璃涂棒,恒温培养箱布讨例的最常。
2. 试剂
培养基(不加抗菌素),LB培养阶记法哥配基(加抗菌素),无以利菌ddH2O,IPTG,X-gal。
3. 材与零班管笔硫吃元其采奏料处理
无菌ddH2O,1.5 ml 离心管装入铝制饭盒(灭菌)、移液器吸头装入相应的吸台座元望只移日内头盒(灭菌),20%IPTG(M/V),2% X-gal(M/V,用N,N-二甲基甲酰胺配)。
二、操作步骤
1. 事先将恒温水浴的温度调到42℃。
2. 从-70℃ 超低温冰柜中取出一管(100 μl)感受态菌,立即用手指加温融化后插入冰上,冰浴5~1胶粮0 min。
3. 加入5 μl 连接好的质粒混合液(DNA含量不超过100 ng),轻轻震荡后放置冰上20 min。
4. 轻轻摇福鱼生前试匀后插入42℃水浴中1~2 min进行热休克,然后迅速放回冰中,静置3~5 min。
5. 在超净工作台搞读助已中向上述各管中分别加入500 μl LB培养基(不含批抗菌素)轻轻混匀,然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1 h。
6. 在超明简净工作台中取上述转化混合液100-300 μ坐只历确味伤称甚束均l,分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中,用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
7. 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话,滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal,8 μl 20% IPTG,用酒精灯烧过的玻璃涂布商死河棒涂布均匀。
8. 在涂好的培养皿上做上标记,先放置在37℃恒温培养箱中30~60 min 直到表面的液体都渗透到培养基里后,再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。
9. 在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇,擦干桌面,写实验报告。
10. 观察平板上长出的菌落克隆,以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。