如何终止胃蛋白酶继续酶解蛋白质
我的试验是利用胃蛋白酶不易酶解β-乳球蛋白的原理,用胃蛋白酶酶解乳清粉,从而分离β-乳球蛋白。在做时间单因素试验时需要及时终止胃蛋白酶的反应,而且不能让β-乳球蛋白变性,有什么好的方法?
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回答者:网友
胃蛋白酶与β-乳球蛋白在分子量上会存在差异,可以尝试利用这个原理设计分离方法。 如果用于小剂量分析,可以使用离心法,如果分子量差异较小且实验条件允许,可尝试密度梯度离心,分辨效果很好。如果要处理较大量样品,建议使用凝胶过滤法(即分子筛,详细方法可照色谱法的降解材料实施)。当然,也可以尝试进一步查资料了解一下二者在电荷上的差异,如果这方面差异足够明显,则建议尝试电泳方法(如琼脂糖凝胶电泳法),一般效果也会比较理想。 以上方法只要操作得当,甚至能保留大部分酶组分的活性也不被破坏