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纤维素酶活力的测定 一、目的学习和掌握3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定纤维素酶活力的原理和方法，了解纤维素酶的作用特性。二、原理纤维素酶是一种多组分酶，包括C1 酶、CX 酶和¦Â-葡萄糖苷酶三种主要组分。其中C1酶的作用是将天然纤维素水解成无定形纤维素，CX 酶的作用是将无定形纤维… 3．C1 酶活力的测定 将5mg/mL 的原酶液稀释10～15 倍后用于测定C1 酶活力，以脱脂棉为底物。取4 支洗净烘干的20mL具塞刻度试管，编号后各加入50mg 脱脂棉，加入1.5mL 0.05MpH5.0 的柠檬酸缓冲液，并向1 号试管中加入1.5mL DNS 溶液以钝化酶活性，作为空白对照，比色时调零用。将4 支试管同时在45℃水浴中预热5～10min，再各加入适当稀释后的酶液0.5mL，45℃水浴中保温24h。取出后立即向2、3、4 号试管中各加入1.5mL DNS溶液以终止酶反应，充分摇匀后沸水浴5min，取出冷却后用蒸馏水定容至20mL，充分混匀。以1 号试管溶液为空白对照调零点，在540nm 波长下测定2、3、4 号试管液的光密度值并记录结果。 根据3 个重复光密度的平均值，在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量，按下式计算出C1 酶活力（U/g）。在上述条件下反应24h，由底物生成1¦Ìmol 葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位（U）。 式中：24 为酶活力定义中的24h。 4．CX 酶活力的测定 将5mg/mL 的原酶液稀释5 倍后用于测定CX 酶活力，以CMC 为底物。 取4 支洗净烘干的20mL 具塞刻度试管，编号后各加入1.5mL 0.51％CMC 柠檬酸缓冲液，并向1 号试管中加入1.5mL DNS 溶液以钝化酶活性，作为空白对照，比色时调零用。 将4 支试管同时在50℃水浴中预热5～10min，再各加入稀释5 倍后的酶液0.5mL，50℃水浴中保温30min 后取出，立即向2、3、4 号试管中各加入1.5mL DNS 溶液以终止酶反应，充分摇匀后沸水浴5min，取出冷却后用蒸馏水定容至20mL，充分混匀。以1 号试管溶液为空白对照调零点，在540nm 波长下测定2、3、4 号试管液的光密度值并记录结果。 根据3 个重复光密度的平均值，在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量，按下式计算出CX 酶活力（U/g）。在上述条件下，每小时由底物生成1¦Ìmol 葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位（U）。 5．¦Â-葡萄糖苷酶活力的测定 取4 支洗净烘干的20mL 具塞刻度试管，编号后各加入1.5mL 0.5％水杨酸苷柠檬酸缓冲液，并向1 号试管中加入1.5mL DNS 溶液以钝化酶活性，作为空白对照，比色时调零用。将4 支试管同时在50℃水浴中预热5～10min，再各加入酶液0.5mL，50℃水浴中保温30min，取出后立即向2、3、4 号试管中各加入1.5mL DNS 溶液以终止酶反应，充分摇匀后沸水浴5min，取出冷却后用蒸馏水定容至20mL，充分混匀。以1 号试管溶液为空白对照调零点，在540nm 波长下测定2、3、4 号试管液的光密度值并记录结果。 根据3 个重复光密度的平均值，在标准曲线上查出对应的葡萄糖含量，按下式计算出¦Â-葡萄糖苷酶活力（U/g）。在上述条件下，每小时由底物生成1¦Ìmol 葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位（U）。 五、结果计算 1．葡萄糖（G）标准曲线的制作（表2） 表2 标准曲线测定数据列表
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