先blast一下，引物特异性不好再改变条件也没意义
引物GC% 5‘端或中间高3’低，3’端5个碱基松调眼字内尽量不要有连在一起的CG且少于3个。
引物不要在不政依缩阻功值山搞串联重复区，比如Alu上
如粒果引物没有问题，可以减少引物浓度（100nM)，酶的的用量(1U/50ul)，增约弦几压远协加模板和提高退火温度
退火温度最好在设计时统一，这样实验更方便，一般pp5上概仍板tm55度可以60度退火，上下游引物tm不要差的太多
