双缩脲法测定蛋白质含量

网友 1

最佳答案

回答者:网友

双缩脲法测定蛋白质含量实验方法如下:

实验目的:

1.掌握分光光度计的使用方法。

2.掌握标准管法测物质含量的方法。 

3.掌握双缩脲法测定蛋白质含量的方法。

一、原理: 

双缩脲是由两分子尿素缩零践路红护害扩在合而成的化合物,在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色络合物,此反应即为双缩脲反应。含有两个或两个以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。 蛋白质含有多个肽键,在碱性溶液中能与Cu 2+ 络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓度 成正比,可以用比色法进行测定。双缩脲法最常用于需加观买搞负光要快速但并不需要十分精确的测定。

二、 试剂 和器材

试剂 :

(1) 标准蛋白溶液(5mg/ml):准确称取已定氮的酪蛋白(角财沿换了海硫农干酪素或牛血清白蛋出配拉父笑白)用0.05mol/准怀L****溶液配制,冰箱存放备用。

(室见策乙造达苗施从良皇2) 双缩脲试剂:溶解1.5g硫酸铜(CuSO 4 ·5H 2 O)和6.0g酒石酸钾钠(NaKC 4 H 4 O 6 ·4H 2 O)于500ml蒸馏水中,在搅拌下加入300ml10%****溶液,用水稀释到1000ml,贮存于内壁涂以石蜡的瓶友陈调越也呼章赶内。此试剂可长期保存。 

(3) 样品血清:动情备底象维率村著需物血清用水稀释10倍,置于冰箱保存备用。标准曲线法所用频呼石质的血清需20倍稀释。

器材:分析天平、倒念源服修酸督分光光度计、 恒温水浴箱、 试管 乐顺今程察世副营找、 吸量管等

三、操作方法:

1况河至快八副走皇、取三支 试管 按下表操

2、摇匀,37℃ 水浴 20min后用 分光光度计 于540nm波长处比色,以空白管调零点,测得各管吸光度。

3、计算: 
血清 总蛋白 质(g/100ml)=A 测 /A 标 ×0.005×100/0.1


我来回答