感受态细胞制备步骤6和8中都加入了cacl2目的一样吗?它们的作用分别是什么
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回答者:网友
不同细菌感受态制备方式相同
方法一:
细菌转化的方法多以Mendel和Higa(1970)的发现为基础,其基本方法是用冰预冷的CaCl2或多种磁沿困刚酒敌践控作2价阳离子等处理细菌,使之进入感受态得以转化。
用CaCl2360问答制备新鲜或冷冻的大肠杆菌感受态细胞,常用于成批制备感受态细菌。本法适用于大多数大肠杆菌菌株,且迅速、重复性好。操作过程简述如鸡下。
1.从37℃培养16~20h的新鲜平板中挑取一个单菌落(如大肠杆菌DH52),或1ml新鲜的16~20h过夜培养物,转到一个含有100mlLB培养基的1L或500ml烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养约2~3h(旋转摇床200~300r/min),每隔20~30min测量OD600值≈0.4。 2.在无菌条件下将细菌转移到一个,用冰预冷的50ml聚丙烯离心管中,在冰上放置10~20min。
3.于4℃用SorvallGS2转头(或与其离心管相配的转头)以4000r/min离心10mi技尽注新供协n,以回收细胞。
4.倒数培养液,将管倒置1min以使最后残留的痕量培养液流尽。 5.以10ml用冰预冷的0毫.1mMCaCl2重悬每份沉淀,放于冰上。
6.于4℃用SorvallGS3转头(或与其相应的转头)以4000r/min离心10min,以回收细胞。