钙离子载体由什么组成
说到载体,应该是一种蛋白质。可是它的具体组成成分有什么? 它对细胞的生长过程有什么帮助呢?对精子获能又是如何作用的呢?
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英文单词vector ,在基因工程重组DNA技术中将DNA片段(目的基因)转移至受体细胞的一种能自我复制的DNA分子。三种最常用的载体是细菌质粒、噬菌体和细菌病毒和动植物病毒。
运载体
在基因操作过程中使用运载体有两个目的:一是用它作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞中去;二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制(称为克隆)。现在所用的运载体主要有两类:一类是细菌细胞质的质粒,它是一种相对分子质量较小、独立于染色体DNA之外的环状DNA(一般有1~200 kb左右,kb为千碱基对),有的一个细菌中有一个,有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移,可以独立复制,也可整合到细菌染色体DNA中,随着染色体DNA的复制而复制。另一类运载体是噬菌体或某些病毒等。现在人们还在不断寻找新的运载体,如叶绿体或线粒体DNA等也有可能成为运载体。
作为运载体必须具有四个条件:①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制;②有多个限制酶切点,而且每种酶的切点最好只有一个,如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点,可适于多种限制酶切割的DNA插入;③ 含有复制起始位点,能够独立复制;④有一定的标记基因,便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因,就可以作为筛选的标记基因。一般来说,天然运载体往往不能满足上述要求,因此需要根据不同的目的和需要,对运载体进行人工改建。现在所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。
基因克隆的载体类型:质粒载体,噬菌体载体,柯斯质粒载体,M13噬菌体载体,噬菌粒载体
用钙离子载体A23187的化学诱导法可促进精子获能在牛精子获能液中添加不同浓度的钙离子载体,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育作了研究.通过对顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率的观察,筛选出获能液中最适的钙离子载体浓度,作用时间及其有利于早期胚胎发育的最佳浓度.结果表明:钙离子载体在诱导牛精子获能上存在一个浓度一时间阈值,其最佳浓度和时间组合是0.1 μM处理2 min或者0.15 μM处理0.5 min,此时的囊胚率最高;钙离子载体的添加不能诱导牛精子获能的发生. 本Ionomycin为Ionomycin calcium,是一种常用的钙离子载体,可以高度选择性结合钙离子(Ca2+> Mg2+>>Ba2+),并且比A23187的效果要好很多。Ionomycin在pH7.0和9.5直接可以结合钙离子,并产生较强的紫外吸收。
Ionomycin常用于转运钙离子穿过各种生物膜。加入Ionomycin最常用于提高细胞内的钙离子水平。通过提高细胞内钙离子水平,Ionomycin可以诱导神经细胞发生细胞凋亡,可以诱导一些细胞产生cell cycle arrest,也可以产生多种由于细胞内钙离子水平升高而产生的其它生物功能。
Ionomycin分子量为747.07,分子式为C41H70CaO9,CAS Number:56092-82-1。本产品纯度大于98%。