硝酸还原酶活性的测定酶促反应在黑暗下进行的原因：因为亚硝酸盐活性酶在光的照射会溶解，会大大降低反应效率，酶难以恢复活性。
反应液的酸度大则增加重氮化作用的速度，但降低偶联作用的速度，颜色比较稳定。增加温度可以增加反应速度，但降低重氮盐的稳定度，所以反应需要在相同条件下进行。这种方法非常灵敏，能测定每ml含0.5μg的NaNO2。
常用比色法
即利用NO3和NO3-还原生成的NO2-与重氮试剂FORNH或FADH偶联反应，生成红色的重氮化合物，该物质在相应波长处具有最大的光吸收，根据单位时间内光吸收值的变化可计算出硝酸还原酶(NR)的活性强度，此法重现性好，设备简便，但操作较为复杂。
