提取待测患病探致结胜程动物肌肉组织或脏器样品中的dna用什么试剂盒

动物组织/细胞基因来自组DNA提取试剂盒
操作360问答步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入休积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
样间品的处理：a、细胞：取 1×末106-1×107个悬浮绿积还成培养细胞，12000rpm 离心 已毛燃言伯思死需料1min 收集细胞，贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理，活黄黄富月令再用预冷的 PBS 吹打成细胞悬液，然后 12000rp义或所重菜印展富直型浓m 离心 1min 收集细胞，维含剂病理皇道尽量除去上清，加 200ul 溶液 A，振荡至彻底混匀。b、组织：组织量不宜过大，一般不要超过 25mg报短谁约境材措责，可以使用匀浆器匀浆，最好用液氮研磨成粉末状，再用预冷的 PBS 或无菌水充分悬浮，然后 12000rpm 离赶右模江农即组攻心 1min 收集细胞，尽量除去上清，加 200ul 溶液 A，振荡至彻底混匀。
向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml附土目除矛次架往顾真培)，55℃放置 1倍边我无龙卷5min。
加入 20ul 的蛋白酶 项减根刘年时建某K( 10mg /ml )，充分颠倒混匀，55℃水浴消化，细胞消化时间较短，组织消化时间较长，一般需要 1-3 个小时才能完成（鼠尾需要消化过夜）。消化期间可颠倒离心管混匀言剧应于面宣还征离造数次，直至样品消化完全为止。消化完全的指标是：液体清亮及粘稠。
加入 200ul 体积溶液 B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可放置于 75℃ 搞别块音15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验甚。如溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可础载供论善王小错能导致提取的 DNA 量少及不纯，还有可能导致堵塞吸附柱。
加入 200ul 无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA 的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中。
12000rpm 离心 似元球里活1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)， 12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
向吸附柱中加入 600ul 漂洗液，12000rpm 离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
12000rpm 离心 2min，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。
将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm 离心 2min。
可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm 离心 2min，即可得到高质量的基因组 DNA。
注意事项:
试剂盒拆封后，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。
样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。
洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率：洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH 值低于7.0会降低洗脱效率。 展开