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稳定株（单克隆）构建实验方法
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实验概述
成功感染同时表达puromycin抗性和目的基因慢病毒的细胞，能在含一定浓度puromycin的培养基中存活，而未感染上慢病毒的细胞则无法存活。因此，在puromycin抗性筛选压力下，稳定表达目的基因的细胞株可被成功筛选获得。如果慢病毒同时带目的基因或针对目的基因的shRNA，感染细胞并用puromycin进行筛选，即可获得稳定表达该目的基因或shRNA的稳定细胞株。对上述稳定细胞株进行稀释培养，挑取单一细胞生长而成的细胞克隆，再进行扩大培养，以获得性状单一、稳定的细胞株。该实验常使用同时表达GFP的病毒对目的基因的表达进行示踪，以便于单克隆筛选。
实验仪器与材料
仪器：CO2培养箱（MCO-15ASANYO）倒置荧光显微镜（XDS-100上海蔡康光学仪器有限公司）超净台（EQR/GL-41ESCO）离心机（TDL-50B安亭）隔水式恒温培养箱（GHP-9080Bluepard）；通风橱；材料：移液器（P1ml，P200，P20，P10，P2，GILSON；4415678，eppendorf）；吸头（10µl，100µl，1000µl，Axygen）；盖玻片（24×60mm）；培养板（3599corning）试剂：培养基(RPMI1640,31800-012Invitrogen或DMEM,12800-017Invitrogen)胎牛血清(10099-141Invitrogen)0.25％胰蛋白酶D-Hanks液
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实验步骤
1.2.将目的细胞接种于48孔板中至70-80%融合度待细胞贴壁后，加入puromycin药物进行空细胞致死最低浓度
