枯草芽孢杆菌培养基的配制方法？

枯草芽孢杆菌常用培养基配方：
1L蒸馏水+20g葡萄糖360问答+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂
枯草芽孢杆菌原生质体的制备
1
培养枯草芽孢杆菌
取亲本菌株T4412、TT2
新鲜几真光省大皮诉斜面分别接一环到装有液体完室附娘顾问全培养基(CM)的送送粮质织文何讨意够试管中，36℃振荡培养14
h，各取1
mL
菌液转接入装有慧顷冲20
mL
液体完全培养基的250
mL
锥形瓶中，36℃振荡培养
3
h交销刻两香权只如功括，使细胞生长进入对数前期，守的层至刑积束谁多前歼各加入25
u/m报城L
青霉素，使其终浓度为0.3
吃动倍u/mL，继续振荡乎持条露律绝定学法伏培养2
h。
2.
收集细胞
各取菌液10
mL，4000
r/min
离心10
min，弃上清液，将菌体悬浮于磷脱希书微坚式茶酸缓冲液中，离心。如线失组夜差在奏师比虽互此洗涤两次，将菌体格促罪悬浮10
mL
SMM
中，每mL
约含108～109
活菌为宜。
3.
总菌数测定
各取菌液0.5
mL，用生理盐水稀释，取10-5、10-6、10-7
各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36℃培养24
h
后计数。此为未经酶处理的总菌数。
4.
脱壁
二株亲本菌株各取5
mL
菌悬液，加入5
mL
溶菌酶溶液，溶菌酶浓度为100
ug/mL，混匀后于36℃水浴保温处理30
mi诗接苏企n，定时取样，镜检观察原生质体形成情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用4000
r/min
离心10
min，弃上强镇况清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5
mL
高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。
5.
剩余菌数测定
取0.5
mL
上四每杆离批垂述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取10-2、10-3、10-4
稀释液各0.1
mL，涂布于完全培养基平板上，36℃培养24觉上矛刑～48
h，生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。
计算酶处理后剩余细胞数，并强年在己满那财当盾管分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率＝未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。