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请问哪位专家知道做RT-PCR标准曲线稀释质粒时用枪至少打多少下才能混匀？我做的相关系数越来越离谱了！

请专家在做RT－PCR具体操作上给点建议！谢谢！

网友 1

最佳答案

回答者：网友

随便吹打10次即可，注意每次都要离心一下以免有液体溅到管壁。

标准曲线只要能包括你的样品浓度的上下限就行了，不要稀释的太多，否则非特异扩增会增加，如果你是使用Sybr这样的非特异性染料的话，非特异扩增影响会很大。

另外你可以把PCR产物跑胶甚至纯化之后酶切一下，确定是不是只有你要的单一目的片断被扩增。

还可能是你的模版被有PCR抑制作用的物质污染比如苯酚或者SDS之类的残留

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