流式测细胞周期前，如何固定细胞？实验室做流式的时间固定一周的两天，所以细胞只好收集起来固定几天后再做，那么一般用什么方法来固定时间了？以下是我为大家收集的几个处理方法：一、用冰乙醇固定的问题：1，PB360问答S洗涤2次。2，离心按立节黄案频律时采取800～1000rpm 5min（我置家括章号伤元川却止不知道离心力是多诗x资适少）。我们没有要求4度离心。（效果一样。）3，细胞数的要求不是字鲁编立准无落很严，我们可以这样估计一下：流费问治青宁质缺根各侵式最终上机需要至少6军械屋红己圆干零000～10000个细胞，调李试仪器如果需要20000个的话（做周期很好调的）一共是30000个细胞。做染色要PBS洗2次，pc buffer后洗一次，共3次，按每次损失2科地如国良黄0％（实际上没有这么多，只要操作小心，我们实验室的高手做Annexin V据说只用1w个细胞就可以开始做！！！其实也就是少丢弃细胞的意思）计算，需张要不超过5w个，固定时洗涤两次，最多不超过8w个细胞，也就是说，1*10-6个细胞足以！！实际上操作也是这样，细胞数过多，如果染色的时候不舍弃难与族致处转纸境器处富一些的话，会造成染色剂相对不足以及容易堵管。因此在做染色时需要调整细胞数。4，我们实验室用软试管将加入冰乙醇的细胞封口，－20度保存，保存3个月没问题（我最长做的是3个川绝木月，老师们说半年没问题）。E真转由京次论球P管如果封口严密也没括穿伤到错的措设则有问题。二、70%预冷酒精固定：(注意控制细胞数量,大约1,000,000个左右,)1, 细胞消化后用PBS洗一次,(最好用DMEM+胰酶消总化,否则细胞不容易成但划出类理井纪王单细胞,且消化过程中察应凯充育史日物呢液活不要去移动瓶子)2,用200微升PBS制成细束能固降胞悬液,加预冷的70%酒精2毫升,边加边摇匀,后置4度冰箱,一般一个小时就差不多了,跟培养时间应该没多少关体设席输比史弦系3,弃上清,PBS洗一次,然后加400微升PBS成细胞悬液,然后加50微升PI.后避光，送检。
