请问用分光光度计测定（丙酮酸脱羧酶，乙醇脱氢酶，乳酸脱氢酶）时，需做标准曲线吗？

（1）确定最大吸收波长：如果前三个物质都有紫外吸收的话，可以用各自的标准品配成一定浓度的标准溶液，先做200-400nm间的光谱扫描（没有颜色就不必做400-800nm扫描了）。确定各自的最大吸收波长，在后面的定量测定时就在该波长下测定A。叶绿素的最大吸收波长可以查资料，在可见和紫外光区都有吸收（也可以照前三个物质做光谱扫描确定）。 （2）确定各自的线性范围：取每一种物质的标准品配成浓度不等的一系列标准溶液（浓度范围较宽些，浓度点多一些），测定A值，然后用Excel或Origin作图，根据图像可以判断是否有线性，线性的浓度范围是多少。这是后续定量测量时的浓度控制范围。 （3）测定：按线性范围的要求配制5-8个浓度不等的标准溶液（最好成等差数列），同时配制试样溶液。测定它们的吸光度值，用Excel或Origin进行标准溶液浓度C与A的线性回归处理，得回归方程。将试样的A代入方程，可算得浓度。后面的处理你知道的。 如果几个都紫外吸收，吸收峰又部分重迭的情况，就必须用多波长测定，列方程联合求解的方法来测定（须预先测定各自在不同波长下的摩尔吸光系数值），单个测量是不行的。