纤维素酶活性

纤维素酶是水解纤维素生产葡萄糖及纤维二糖的一类酶的总称。包括C1酶、CX酶及纤维二糖酶。C1酶使天然纤维素晶体分链，成为直链纤维素。CX酶不能水解天然纤维素，但能分解直链纤维素β-1，4糖苷键生成纤维二糖。纤维二糖经过纤维二糖酶作用生成葡萄糖。以羧甲基纤维素钠盐（简称CMC）作为纤维素酶作用的底物。但需要指出的是CMC无论在结构上还是在性质上都不同于天然纤维素，天然纤维素不溶于水，而CMC有很强的亲水性，非常容易被纤维素酶分解。在相同条件下，同一种纤维素酶分解CMC所产生的还原糖远大于水解天然纤维素所产生的还原糖。 操作方法 pH值为4.6的柠檬酸缓冲浓浓度为0.1mol／l的柠檬酸溶液26．7ml和浓度为0.2mol／l的磷酸氢二钠溶液23．3ml，混合后加水稀释到1000ml。 pH值为5.0的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液取浓度为0.2mol／l的磷酸氢二纳溶液25．7ml和浓度为0.1mol／l柠檬酸溶液24.3m1，混合后加水稀释至 1000ml。 羧甲基纤维素钠盐溶液称取CMC 1g，加水1000ml，在水浴中加热溶解，再加入20mlpH值为5.0的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液和 40ml水，混匀。 样品酶活的测定取纤维素酶粉5g，充分碾细，加100ml蒸馏水，与40℃水浴中，搅拌3Omin，使酶蛋白充分溶出，过滤，离心取上清液，稀释至恰当倍数。吸取稀释的酶液lml，加入 CMC溶液4ml，混匀，在40℃保温糖化30min，