rna在酸性条件下水解原理:
核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键,在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶。不同来源的核酸酶,其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA,称为核糖核酸酶(RNase),催化RNA水解的一种核酸内切酶。
反应产物是单核苷酸和寡核苷酸,不同核糖核酸酶催化产物的低聚核苷酸组成有差别,核糖核酸酶T1使之产生单核苷酸和以3鸟苷酸为组成的或末端为3鸟苷酸的低聚核苷酸,核糖核酸酶T2使之产生单核苷酸和以3腺苷酸为组成的或末端为3腺苷酸的低聚核苷酸。
RNA 提取策略:
RNA降解的原因内源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因,因为人体细胞自身就是几十分钟(20min?)mRNA被降解一轮,所以不管是组织还是细胞还是液体状样本在离开其中细胞的最佳生活状态后都应该尽快的被妥善的方法保存起来。外源性RNA酶也是一个需要注意的因素,最常见的就是毛发尤其头发,灰尘,唾液,塑料手套这四个兄弟。
针对它们我们应该戴帽子,口罩,橡胶无菌手套,在清洁灰尘少的地方提取RNA。我上面说了内源性RNAase污染才是关键,所以有些同志没有注意这些对外源性RNAase的防护RNA也提取的很出色。但是如果你运气不太好的话外源性RNAase污染影响很大的。