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免疫磁珠和琼脂糖珠进行免疫共沉淀的区别 （1）转染后24-48 h 可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°c， 最大转速离心30 min后取上清； （2）取少量裂解液以备western blot分析，剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液，4°c缓慢摇晃孵育过夜； （3）取10μl protein a 琼脂糖珠，用适量裂解缓冲液洗3 次，每次3,000 rpm离心3 min； （4）将预处理过的10μl protein a 琼脂糖珠加入到和抗体孵育过夜的细胞裂解液中4°c缓慢摇晃孵育2-4h，使抗体与protein a琼脂糖珠耦联； （5）免疫沉淀反应后，在4°c 以3,000 rpm 速度离心3 min，将琼脂糖珠离心至管底；将上清小心吸去，琼脂糖珠用1ml裂解缓冲液洗3－4次；最后加入15μl的2×sds 上样缓冲液，沸水煮5分钟； （6）sds-page, western blotting或质谱仪分析。 注意的问题： （1）细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质相互作用，多采用非离子变性剂（np40或triton x-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。不能用高浓度的变性剂（0.2%sds)，细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的cocktailer。 （2）使用明确的抗体，可以将几种抗体共同使用。 （3）使用对照抗体：
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