如何对已灭菌的培养基进行无菌检查

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一般灭完菌后将培养基放在30-37度的环境中培养一天,看其有没有长菌(液体看是否变浑浊,固体看是否长菌落),即可知是否灭菌后为无菌。

培养基配制完毕后,应立即灭菌,通常在高压蒸汽灭菌锅内,汽相120℃条件下,灭菌20分钟。也可采用间歇灭菌法进行灭菌,即将培养基煮沸10分钟,24小时后再煮沸20分钟,如此连续灭菌三次,即可达到完全灭菌的目的。

经过灭菌的培养基应置于10℃下保存,特别是含有生长调节物质的培养基,在4~5℃低温下保存要更好些。

扩展资料

培养基在使用前通过高压或过滤灭菌,防止污染应该注意以下事项:

(1)确认工作细胞库是否被污染,确认毒种工作种子批是否被污染,确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。

同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中,可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养,48小时即可观察有无污染。

(2)其它:高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证,确保灭菌和除菌效果;前者应在投产前及其后的每6个月进行验证,后者应在每次除菌前、后进行验证工作(至少应在除菌后进行一次)。

(3)另外,应将有毒区与无毒区严格分开,并有各自独立的空气净化系统及孵室,有毒区对无毒区应保持相对负压,防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。

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