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基质辅助激光解吸电离飞行间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)20世纪80代发展起种新型软电离机质谱, 作种新兴蛋白质组检测技术, 现已广泛应用于命科及相关领域同作项新兴微物鉴定技术, 受内外广泛关注与传统化表型鉴定物相比, MALDI-TOF MS具操作简单、快速、准确经济特点早1975, ANHALT等[1]利用质谱仪结合高温裂解技术第1完细菌鉴定, 拉质谱鉴定细菌 序幕 随着质谱检测技术断完善发展, 近, MALDI-TOF MS已经功应用于微物鉴定, 显示其细菌、酵母菌等鉴定面均具良应用价值众研究表明, MALDI-TOF MS技术培养纯菌落进行菌种鉴定具高稳定性及准确性, 见细菌酵母菌属鉴定率能达97%~99%, 种鉴定率能达85%~97%; 另外, MALDI-TOF MS缩短细菌鉴定间, 且其本较规鉴定低[2, 3]除外, MALDI-TOF MS已经能够功用于部微物亚种水平鉴定细菌耐药性检测, 种数情况应用于培养纯菌落鉴定[3]
能够临床本直接检测细菌/真菌, 突破细菌/真菌培养阳性率低、培养间瓶颈, 细菌/真菌染性疾病诊疗提供更快、更准确病原依据, 临床及控制细菌/真菌染性疾病起更作用内外者已尝试质谱技术应用于临床本直接检测, 并取显著进展本文MALDI-TOF MS技术临床本直接检测应用作综述
、MALDI-TOF MS检测原理
MALDI-TOF MS技术用于微物鉴定实质检测具属、种或亚型特异性物标志质量信号, 主要微物菌体内高丰度、表达稳定进化保守核糖体蛋白MALDI-TOF MS 仪器主要由基质辅助激光解吸离源(MALDI)飞行间质量检测器(TOF)两部组MALDI原理用定强度激光照射本与基质形共结晶薄膜, 基质激光吸收能量汽化, 并迅速降解, 使本解吸附, 基质本间发电荷转移使本发电离; TOF原理带电荷本电场作用加速飞飞行管道, 离质荷比与离飞行间呈比, 所同质量离达检测器飞行间同检测, 离峰纵坐标、离质荷比横坐标形特征性质量图谱同种属微物经MALDI-TOF析所形质量图谱与数据库参考图谱进行比较, 实现目标微物种或菌株区鉴定[2]
二、MALDI-TOF MS直接检测临床本流程
临床本直接检测流程主要包括3部:临床本预处理、本机检测比蛋白质指纹图谱数据库鉴定结由于目前报道临床本阳性血培养瓶段尿本, 面二者例介绍其直接检测流程, 其临床本检测流程与类似
()临床本预处理
MALDI-TOF MS直接用于临床本检测2基本要求:(1)临床本细菌量准确鉴定图谱, MALDI-TOF MS技术置于靶板细菌低检测限约(1× 10^4)~(1× 10^6)cfu/mL若要直接检测拟似血流染血液本及拟似泌尿系统染段尿等临床本病原菌, 首先必须富集细菌; (2)临床本质由于血液血培养瓶血红蛋白其蛋白、尿液白细胞等机干扰细菌谱峰, 所直接检测前需要采取预处理措施除些干扰素
1.阳性血培养瓶直接检测 直接检测阳性血培养瓶细菌浓度需要1× 10^7 cfu/mL[2, 4]由于血流染患者血液细菌量低(低< 1~10 cfu/mL), 血本直接检测需要增菌程, 即采用血培养瓶增菌目前已报道阳性血培养病原菌预处理程序各相同, 预处理程主要包含2步骤:(1)细菌血细胞离先应用温污剂(吐温-80、十二磺基硫酸钠、皂素等)血液血细胞溶解, 通同流程(离、洗涤)除其干扰素, 纯化要鉴定细菌本; (2)菌体蛋白质抽提用混合溶剂处理, 使用甲酸/乙腈溶液本进行处理抽提蛋白, 利用2种溶剂混合作用菌体表面蛋白存于细胞
