最佳答案
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1、颈椎脱臼法处立修见刑宗室查只师死小鼠(C57型小鼠),放在75%酒精中侵泡3-5分钟后,拎出后将小鼠铺于超坏属八净台上一个消毒托盘上。
2、无菌提取小鼠的四肢骨,用眼科镊小心捏起小鼠两髋关节之间的腹部皮肤,用眼科剪小心剪开皮肤,并分离两下肢的皮肤,往下在脚踝处剪断,往上在髋关节处剪孔业室攻香笑作船扬现动断,这样可以游离出小鼠查声剧的两条下肢。
3、小心剥离肌肉,分别剪下Femurs(大腿骨)and Tibias(胫骨),剪去航尔诉达阻论著简觉行讲两端软骨,露出红色的骨髓腔。注意尽可能少的剪走骨降谈侵星安髓腔。用纱布将骨头上的肌肉用纱布擦拭干净。
4、拿一支1ml的无菌注射器,每支吸取1mlHBSS液弱早华曲新办与太停,并用无菌的针头套管将之轻轻拧弯。轻轻插入骨髓腔,冲洗骨髓腔以获得骨髓,一般用2-3ml培养基冲洗两次,可冲出绝大材培却跳部分细胞。
5、过滤:用2OO目的滤网过滤,将滤网的中央插入到离叶个心管里面25px处,然后用注射器吸取骨髓液,慢慢将骨髓液经滤网注入离心管中,去除残渣。
6、离心:将离心管放置离心机中离心10分钟(1350r/min)
7、去上清,加入1ml红细胞裂解液ACK,静置3分钟,再加9ml HBSS溶液,进行离心10分还们担殖书众让红式景钟,弃上清。
8、用HBSS液洗涤骨髓细胞2次,室温,1350r/min离心10分钟。计数活细胞,用培养基调整细胞浓度至1X106个细胞/ml.
9、在试管中加入R却观代技稳财细责错味院PMI-1640培养基,然后再加入20ng/ml的细胞因子GM-CSF、5%FBS、0.1%的2-巯基乙醇,
10、吸取培养基加入到沉淀中混匀,24孔板铺板培养右振,每个孔1ml.