1． 酸性磷酸酶（ Acid phosphatase）Gomori 氏显示法，其孵育液成分有（1）0.05M醋酸缓冲液PH5,(2)β-甘

1． 酸性磷酸酶（ Acid phosphatase）Gomori 氏显示法，其孵育液成分有（1）0.05M醋酸缓冲液PH5,(2)β-甘油磷酸钠,(3)醋酸铅,(4)5%氯化镁.试述该孵育液各成分的作用如何?

调节 ph

底物

捕捉剂

激活剂

2.酶组化对照实验的方法有几种?

显示酶的细胞化学染色法都需用酶的抑制剂处理作为对照实验。

特异性抑制剂：如四异丙基焦磷酰胺对ChE

非特异性抑制剂：热

竞争性抑制剂：如丙二酸钠对SDH

假阳性结果可用下列对照排除非酶反应的干扰

1.切片在保温前用沸水、强酸、氧化剂和重金属等处理使酶破坏。

2.用特异性抑制剂

3.免去底物。

3.凝集素-ABC法能特异的显示组织标本中什么成分?试简述其原理

. 亲和素（Avidin）可与生物素或荧光素、酶等偶联

生物素（Biotin）可与抗体交联，也可与酶标记物结合。

凝集素它一方面能与细胞膜的游离面和胞内膜囊内表面上的特定糖链结合，另一方面又可以和荧光素、HRP、铁蛋白、胶体金、生物素等结合，使胞膜上的单糖可视化

亲和物质之间有高度亲合力，而且可以与标记物如荧光素、酶、同位素、铁蛋白等相结合。

凝集素是一种无免疫源性糖蛋白或结合糖的蛋白质，它一方面能与细胞膜的游离面和胞内膜囊内表面上的特定糖链结合，最大特点是结合的专一性，每一种凝集素只对某一种特殊的碳水化合物有特异亲和力，其结合能力还因受体（糖链）的空间结构、结合位点而异。另一方面又可以和荧光素、HRP、铁蛋白、胶体金、生物素等结合，使胞膜上的单糖可视化，用于亲和组化或亲和免疫组化。人们可利用凝集素与不同的糖蛋白特异性结合，识别和研究不同类型膜结构的生物学特征。

4.试述显示琥珀酸脱氢酶(硝基蓝四唑盐法)需注意之要点?

1。对标本的处理和制片不能影响酶的活性及分布.

2。 所选择的底物及辅助物必须能迅速和同步地渗透到组织和细胞中去。

3。所选择的底物最好只能被一种酶催化分解。

4。所选择的辅助物不影响酶活性和其他反应剂穿透进入细胞。

5。PRP 必须能迅速与辅助物进行反应，且FRP是水不溶性的有色而稳定的物质。

6。所有参加反应的试剂都不能与组织细胞内除了所检测的酶以外的任何成分自行吸附或结合。

5.免疫组化实验应注意哪些事项?

组化技术要求：

1.保存生活形态结构：选择固定方法及种类

2.保存化学成分：了解被检测物特性。

3.保存定位：使反应产物在原位沉淀、色深、不溶，调整反应条件。

3.有高度特异性：需对照实验，识别假阳性。

二、 填空

1．显示脂类的最好固定剂为（甲醛 ），制片方法为（ 冰冻切片或明胶切片

），封固剂为（ 甘油明胶 ）。

2．荧光染色中激发滤片的选择是根据荧光染料的最大（ 吸收 ）波长，阻断滤片的选择是根据其最大荧光（ 反射 ）波长。

3．甲绿在配制时，应用氯仿去除其中的（甲基紫 ）

4．可对单个细胞逐个进行高速准确的定量分析和分类的新技术是（ 流式细胞仪 ）。在单个细胞中，可同时测得DNA,RNA及细胞体积3个参数，也可测核与细胞的比例，蛋白质和免疫标志的其它参量。

5．以物质分子对光波的选择性吸收为基础，在显微镜下对生物样品微细结构中的化学物质进行定量测定的方法是（ 显微分光光度计 ）