骨组织免疫组化实验步骤(HRP-DAB法)

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备纪维福穿室回乱1. 拷片
石蜡切片37℃烤箱过夜(前一天放入烤箱,也可不做该步)。
脱蜡前于60℃烤箱烘烤2h。

2. 脱蜡与水化
依次将切片放入二甲苯I、II各10min。
乙醇梯度(100%、95%、80%、70%)各5min。
水洗5min。
TBS 3min×3,之后滤纸擦干写会盟组织周围,指甲油描边。

3. 抗原修复(二选一)
3.1 透明质酸酶+胃蛋白酶修复(推荐)
透明质酸酶 37℃ 30min,TBS 3min×3;
胃蛋白酶 37℃ 30min,TBS 3min×3。

3.2 胰酶修复
0.125%胰酶 37℃ 20min,室温冷却10min,TBS 3min×3。

4. 封闭
5%BSA封闭液 37℃ 30min, 甩干不洗。
5. 孵育一抗
TBS或PBS稀释一抗。4℃湿盒过夜。

6. 孵育二抗
TBS 5min×5。
3%H 2 O 2 滴加于切片上,室温避光10min。
滴加聚合HRP标记二抗,37℃,30min
TBS 5min×5。
7. DAB显色
依照DAB显色试剂盒说明书配制DAB显色液销量

显微镜下观察控制显色时间,蒸馏水终止。

8. 复染
苏木素复演地必乡职华染(镜下观察控制)。
调高权概宽采坚和磷酸一氢钠溶液返蓝。
9. 封片
脱水:70%、80%、95%、100%乙醇各3min。
透明:二甲苯I、II各5min。
中性树胶封片(从一侧封片,且封片时勿将二甲苯去除,片子放其帝期急于中一个个封片)。

注意事项:


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