如何构建稳定细胞株？

一种是脂质体转染后，单克隆筛选稳定细胞株。另外一种是应用逆转录病毒，慢病毒转染，筛选稳定细胞株。脂质体转染：在转染24小时后，消化细胞并计数。将细胞种到96孔板，保证每个孔2-3个细胞，这样才能得到单克隆。待细胞贴壁后，加入抗生素筛选。筛选时间和浓度视细胞而定。一般G418一个星期作用，嘌呤霉素2-3天。脂质体法筛单克隆时间较长，且效率低，大概只有1%。病毒转染：先要用包装细胞，一般为293细胞，包装出病毒，再用病毒转染目的细胞。包装病毒视不同类型的病毒而定，一般要3-5天的时间。包装好的病毒要测滴度，根据滴度决定转染目的细胞的病毒量。转染目的细胞1-2天后加抗生素筛选得到稳定细胞株。病毒转染得到稳定细胞株的效率高，只是步骤繁琐。现在很多家公司提供构建稳定细胞株的技术服务，如杭州的波因、南京的凯基等，可以提供各种载体的构建及细胞株的构建整套技术服务。