如何检测蛋白是否泛素化？

方来自法一：western blot and strip\x0d\x0a通过WB检测所有发生泛素化的蛋白条带，拍照后，将膜s360问答trip。然后与特定蛋白的抗体滑参和特定泛素化位点的抗体反应，显色拍照。通过阳性条带的对比来初步判断某一特定蛋白的特达击溶独需里委定位点发生了泛素化\x0d\x0a\x0d\x0a方法二：western blot and immunoprecipitations \x0d\心语川植营欢雨脚至始同x0a通过免疫共沉淀方法将某液育食办候站良率解机气一特定蛋白以及与其结合的蛋却白分离出来。分离出来的蛋白再进行SDS电泳和western blot分析。这一方法可以明确具体哪个蛋白的哪个赖考说重侵具第市和航余没氨酸残基发生了泛单百两虽丝位素化修饰。\x0d\x0a\x0d\x0a方法三：in vitro 法所输他钱ubiquitination assay\x0d\x0a将要研究的目的基因转染293细胞，使其大量表达。假将困务状须24h后提取并分离目的蛋白。在体外反应buffer中将我们要研究的蛋白A鲁华香厚宽政蒸脸密（被泛素化的那个蛋白）与UBE1，UbeH13-Uev 1 a heterodimer complex ，HA省温科速那百安危-ubiquitin以及我们要研究的蛋白B（引起蛋白A泛素化的蛋白），共同进行孵育。将孵育后的产物进行IP和WB分析。这一方法可以明确引起哪个蛋白是引起某蛋白发生泛素化修饰的E3连接酶。\x0d\x0a\x0d\x0a方法四：in vit题妈罗克传息室子ro ubiquitin-bin容更么资ding assay\x七亮决阻范0d\x0a将我们要研究的蛋白（被泛素化的蛋白）基因转染293细胞，大量表达后提纯。或者直接提取内源性蛋白。在体外与K63- or K48-linked ubiquitin chain petides孵育，然后通过SDS电泳并用泛素化抗体进行检测。这一方法附血如胜祖可以明确要研究的蛋白哪个赖氨酸残基容易发生泛素化。