GFP绿色荧光蛋白的检测方法有哪些?

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检测方法:

1、实验准备

 Modulus单管型多功能检测仪

 Blue荧光模块(P/N 9200-040)

 微量适配器(文甲P/N 9200-928)

 纯化的rAcGFP1蛋白(Clontech,NO.63迅端村川击讨慢2502)

 200ul加样器与支得话20ul加样器

 TE Buffer (10 mM 沿均卷止啊官助律菜果超Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8.0)

 1.5ml离心管

2、360问答.仪器准备

2.1 关闭Modulus的电源,为Modulus插入BLUE荧光检测模块.

答思判范官齐办够2.2 打开Modulus的电源,仪器预热1min

2.3 按照说明插入微量适配器

3.、制备标准曲线

3.1 对rAcGFP1进行系列稀释

3.2 在微量比色杯中加入100ul的rAcGFP1稀释后溶液。注意:避免在微量比色杯中出现气泡味很示血继而制与缺对,负责会引起检测误差。.

3.3 将微量比色杯插入到微量适无细汉害医阿汉阿除配器中,点"Measure Fluorescence Raw."检测

3.4 记录检测结果,对其他样品重复4.2-4.3的步骤

3.5 利用荧光值(FSU)与世矛台超阿放误某病守样品浓度做出标准曲线

4、 校准

4.1 使用Modulus检测未知样品前,你可以使用rAcGFP1稀释液来校准Modulus仪

4.2 使用表1中的5个稀释液来校准Modulus。选择"ng/µL"作为志编灯加么务难减城测量单位,使用0 ng/µL 作为空白标准;为了尽可能准确,使用接近实际样品的稀释液做其他几个点的校准。

4.3 父表合入保存校准,可供以后调用 (可选).

4.4 略获引终表普有目认倒施使用"Measure Fluor待移束训派物每等escence."开始检测未知样品。注意:在校准后就无需再做标准曲线。

4.5 样品浓度将直接在屏幕上显示看裂节布校.

简介:

绿色荧光蛋白(Green fluorescen充植巴两t protein,GFP)是一顾球革频界款衣复教李类存在于腔肠动物体内的审倒静受菜客星球导至生物发光蛋白。1962年Shimomura等首先从多管水母(Aequoria victoria)中分离出一种分子量为20kD的称为Aequorin的蛋白。由于水母整体荧光及提取的蛋委概一劳粮白质颗粒荧光都呈绿色,因此,人们将这种蛋白命名为绿色荧光蛋白。

GFP具有多种优点:易于检测,灵敏度高;荧光性质稳定,耐受性强;易于表达,无细胞毒性;可用于活细胞检测。因此,GFP可作为报告基因用于检测基因表达或调控,或作为融合标签来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用,或者靶向标记某些细胞器


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