枯草芽孢杆菌培养基的配制方法？

枯草芽孢杆菌常用培养基配方：
穿防推代婷普量听应施1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂
枯草芽孢杆菌原生质体的制备
1培养移六虽难影严光待显枯草芽孢杆菌
取亲本菌株T4412、TT2新鲜斜面分别接一环到装有液体完全培养基(CM)的试管中，3开合到是想超场晚逐被6℃振荡培养14h，各取1mL菌液转接入装有20mL液体完全培养基的250mL锥形瓶中接，36℃振荡培养3h，损令争轻化销优使细胞生长进入对数前期，般跑溶波危层加聚构主岁各加入25u/mL青霉素，使其终浓度为0.3u/mL，继续振荡培养2h。
2.收集细胞
各取菌液10mL，4000r/min离心10min，弃上清液，将菌体悬浮于磷酸缓冲液界委院中，离心。如此洗涤两次，将菌体悬浮10mLSMM中，每mL约含108～109活菌为宜。
3.总菌数测定
各取菌液0.5mL，用生理盐科犯生水稀释，取10-探展议五5、10-6、10-7各1mL(每稀释度作两个平板)、倾注完全培养基，36℃培养24h后计数。此为未经酶处理的总菌数。
4.脱壁
二株亲本菌株各取5mL菌悬液，加入5mL溶菌酶溶液，溶菌酶浓守觉逐防抗度为100ug/mL，混匀后于36℃水浴保温处理30min，定时取样，镜检观察原生质体形成急屋客清武敌你自商情况，当95%以上细胞变成球状原生质体时，用400内语值划0r/min离心10min，弃上清液，用高渗缓冲液洗涤除酶，然后将原生质体悬浮于5mL高渗缓冲液中。立即进行剩余菌数的测定。
5.剩余菌数测定
取0.5mL上述原生质体悬液，用无菌水稀释，使原生质体裂解死亡，取10-2、10-3、10-4稀释液各0.1mL，涂布于完全培养基平板上，36℃培养24～48h，生长出的菌落应是未被酶裂解的剩余细胞。
计算酶处理后剩余细胞数，并分别计算二亲株的原生质体形成率。原生质体形成率＝未经酶处理的总菌数一酶处理后剩余细胞数。