免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)原理

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免疫沉淀（Imm来自unoprecipitatio360问答n,IP）原理IP是利用抗原蛋白质和抗体的孔特异性结合以及细菌蛋白质的“proteinA/G"特异性地结合到抗体（免疫球蛋白）的FC片段的现象开发出来的方法。目
前多用proteinA/G预先结合在argarosebeads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，部请友曲激beads上的prorein未A/G就能达到吸附抗原的目的。通过低速离心，可以从含有目的抗原的溶液中将目的抗原与其它核关朝探抗原分离。
免疫沉淀实验的操作步骤比较多，同时由于在非变性条件下进行实验，所以要得到一个完美的实验结果，不仅需要高质量的抗体，同时对免疫沉淀体系也需要有严格的控制指源既标。免疫沉淀实验从：蛋白样品处理；抗体-agarosebeads孵育；抗体-a密garosebeads复基本实验步骤
(1）收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上或者4℃裂解30min，12,000g离心30云min后取上清；(2)取少似维苏月厂左游连量裂解液以备Westernblot分析，剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50μlproteinA/G-beads加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜节无聚；(3）免疫沉淀反应后，在4°C以3,000g速度离心5min，将proteinA/G-beads离心至管底；将上清小心吸去，proteinA/G-beads用1ml裂解缓冲液洗3－4次；最后均队足势话唱记加入15μl的2×SDS加样易判势联族缓冲液，沸水煮1胜深五承非洋六名0分钟；(4）SDS-执京投散为色良PAGE,Westernblotting或进行质谱分析。一、样品处理：免疫沉淀实验成功与否，第一步处理样品非常关键。特河步东沙攻免疫沉淀