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快速曲霉菌基因组DNA的提取方法 3150年11月第31卷第22期HebeiMedicalJourna来自l,2009,Vol3lNovNo.22
快速曲霉菌基因组DNA的提取方法
金欣陈建魁于农宋世平360问答尹秀云
【关键词】DNA提取;曲霉
【中图分类号】紧八守甲秋齐排众R379【文献标识码】A【文章编号】1002—7386(2009)22—3150
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随着骨髓移植,器官移植的广泛应用,侵袭性曲霉感染逐 渐增多.研究曲霉致病的分子机制以及进行临床快速基因诊 断已成为研究的热点』.而这些工作的前提就是获得没么基延否垂界去足量,高 质,稳定的供分析用的DNA分子.我们经过反复摸索,比较找 出一个较为简便,经济,可靠的方法,报告如下.
1材料与方怀吗担掌座银加法
1.1菌种烟曲霉标准株(ATCC10894)由军事医学科学院微 生物研究所提供,黄曲霉,黑曲霉的供任个般优切想些李易标准菌株和临床菌株由军 事医学科学院附属医院检验科微生物室提供.常规保藏,定期 传种.
1.2DNA提取(1)将曲霉菌换措程深血接种至沙堡弱培养基(SDA) 上,28~C培养10d,共5个平皿.(2)用DNA提取液冲洗得到 孢子套怀标微按困露为利悬液,用无菌接种环轻轻刮取菌鸡请类供由丝体直到完全溶解,收酸集 孢子菌丝悬液约5ml.(照米选化数3)DNA提取液的成分:2%(v/v)Tri— tonx一100,10%(w/v)SDS,0.1mol/LNaCI,0.O1mol/LTris—Cl (pH值8.0),1mmol/LEDTA.(4)加10%SDSlml氯化苄3 ml,玻璃珠lg剧烈震荡30分钟,直到肉眼观察呈乳状.(5) 52cc水浴1h,每10min震荡混匀1次.(6)加等体积Tris饱和 酚:氯仿(1:1)}昆合液,充分颠倒混匀,7000r/rain离心10min, 将上清转移至另一离心管,加等体积氯仿,充分颠倒混匀,7000
