亲和层析his标签融合蛋白为什么用2mM咪唑缓冲液洗脱荧光最亮?

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看了你的补充,总算明白你的困惑是什么了。
蛋白质和镍的结号识机苗须速合只是比较松散的结合,只是一种竞争性的结合,但不能彻底使蛋白质变性,具体情况你可以看看生物化学书里的有关竞争性抑制剂的内容
现呀谓帝川制运1.EDTA可以和金属离子螯合成稳定(注意是稳定,表示基本很难分离)的化合物,换另一种说法就是,EDTA与金属离子的结合比柱子材料与金属离子的结合能力强,所以EDTA与金属离子结合而从柱子上脱落,表现出来的情况就是EDTA能把金属离子洗下来。EDTA可是著名的螯合剂哦,几乎常见的金属离子它都能与之螯合。所以EDTA把镍+蛋白与困导药危应质洗下来是螯合作用,EDTA与镍螯合,顺带连着蛋白质一起洗脱
2.但咪唑的情况不一样,这里就是竞争性的问题了(还是建育司货胡议你去看看竞争性抑制剂的内容)
咪唑和镍相比,咪唑与蛋白质的结合能力更强,但咪唑无法与镍结合(或是螯合、总之是个反应)所以咪唑洗下的是蛋白质而不是蛋白质+镍
如果还不明白可以给我发信

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