体外培养细胞的染色体标本如何制备?

体外培养细胞的染色体标本如何制备?
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回答者:网友
博凌科为解答:1.体外培养的细胞,在倒置镜下观察到有较多的分裂细胞(传代后24小时,圆形发亮的细胞)时,加入秋水仙素溶液, 终浓度为0.3ɡ/ml培养液;2.继续培养4小时;3.胰酶消化收集细胞离心管;4.离心1000转/每分钟,离心8分钟,去上清;5.Hank's液洗,离心,去上清;6.低渗处理:加入0.075M Kcl溶液10ml搅匀,37C置30分钟,用吸管稍吹打;7.离心,去上清;8.固定:加入固定液(甲醇:乙酸=3:1)10ml,沿管壁慢慢加入,吹打均匀,室温置15分钟;9.重复步骤7、8;10.离心,去上清;11.加入少许(视细胞多少而定)新鲜固定液,制成细胞悬浮液;12.滴片:(玻片要事先洗净,泡蒸馏水,置4C冰来自冻处理备用),火焰广露鸡既烈烘干或气干;13.60C烤片14小时以上;14.染色体G显带处理:A.片360问答子经0.025%胰酶37C处理约15-司则处裂感频乙巴盾终可30秒(看具体情况而定)PH:7.2;B.冲洗;C.染色10分钟 (磷酸缓冲液PH7.2-7.4配Giemsa溶液);15.晾干;16.镜检分析;17.显影摄影与核型分析。注意:1.秋水仙素加入时间不宜过长,太长染色体变短。2.低渗时间稍短,太长细胞易破碎。3.滴片越高越好,靠高度破裂细胞。

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