组胺检查法
2018年03月22日 16:34
组胺

  试验动物  豚鼠1只(250~350g),雌雄不限。  

  MP100型十六道生理仪、恒温水浴槽、注射器(1ml)、移液管(1ml和5ml)、电子天平、剪刀、镊子等。
  试剂  蒸馏水、氯化钠注射、氯化钾、氯化钙、氯化镁、磷酸二氢钠等。 
  药品  硫酸阿托品、磷酸组胺对照品、供试品 试验方法 实验准备  将离体器官浴筒洗净并干燥,备用。  
  将恒温水浴槽接通电源,加热使其温度保持为34~36℃,备用。
 对照品溶液:取磷酸组胺对照品1支, 加水配制成每1ml含1.0mg组胺的对照品溶液,用氯化钠注射液继续稀释。    A溶液:称取氯化钠160g、氯化钾4g、氯化钙2g、氯化镁1g、磷酸二氢钠0.1g,加水溶解并稀释至1000ml。  B溶液:取A溶液50ml,称取硫酸阿托品0.5mg、碳酸氢钠1g、葡萄糖0.5g,加水溶解并稀释至1000ml(24h内使用)。
  离体肠段的固定:  取禁食24h的豚鼠,处死。剖取远端小肠(距离盲肠2cm)一段约2cm长的肠段,用注射器抽取溶液B,小心冲洗除去肠段的内容物。两端用细线结扎,在肠段中部作一横的小切口,将其放入体积20ml的离体器官浴筒中,该浴筒含有溶液B,维持恒温(34~36℃),并通入95%O2和5%CO2的混合气体。肠段一端用细线结扎固定在靠近浴筒底部,另一端细线附着在十六道生理仪拉力转换器上。根据其灵敏度加以调节使对肠段的拉力约为1g,记录该肠段的收缩。用溶液B冲洗器官浴筒,让浴液保留10min。再用溶液B冲洗2-3次。
   实验方法  用磷酸组织胺溶液0.2~0.5ml加入浴液中,刺激其一系列的收缩,找出可重复的低于最大收缩反应的组胺浓度,即为高剂量(SH)。每次加入组胺前,用溶液B冲洗浴筒3次,使肠段能完全松弛。加入等体积的组胺溶液,引起收缩反应约为高剂量的一半,而且可以重复出现,此剂量为低剂量(SL)。等体积的供试品原液(T1、T2、T3……)。按顺序将SH、SL、T1、T2、T3……依次加入溶液B中,记录反应值。
  品种干扰判定方法  
 a) 如T1不引起肠段收缩,则更换新的溶液B,并加入等体积的S1 T1,如果产生的收缩与加入的组胺量不相符,则说明此检查方法对该品种有干扰。 
 b) 如供试品溶液可以引起收缩,则重复SH、SL、T的次序两次,如供试品引起的收缩不能重复出现,或者随后对组胺高、低剂量的反应被减小,则说明此检查方法对该品种有干扰。 
  品种无干扰判定方法 
 a) 供试品如引起肠收缩,可调节其浓度,找出低于组胺高剂量收缩幅度的浓度,并重复SH、SL、T的次序两次,如T引起的收缩可以重现,并且SH、SL的反应不变,则此品种可以用组胺检查法检查,如果测出的组胺量不超过药典正文中规定的降压物质检查法规定的限值,即符合规定。
  b) 如T不引起肠段收缩,且更换新的溶液B后,加入等体积的S1 T后产生的收缩与加入的S1引起的收缩相符,则认为此品种符合规定。
  c) 各品种的限值:注射用抑肽酶的限值为1.5单位的抑肽酶所含的组胺量不得多于0.1μg、注射用果糖二磷酸钠的限值为每50mg(以无水物计)所含的组胺量不得多于0.1μg、复方氨基酸注射液(18AA)的限值为每1ml所含的组胺量不得多于0.1μg、乳糖酸阿奇霉素的限值为每2000单位所含的组胺量不得多于0.1μg。
 
 
 
 
 
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