人气管上皮细胞的传代方法你知道吗?
2023年04月25日 10:10 学术化工
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  气管上皮是气道与外界环境接触的第一道防线,不仅是各种病原体、炎症介质作用的靶细胞,还作为效应细胞合成、释放多种炎性介质和细胞因子从而参与气道炎症及免疫反应。体外培养的原代气管上皮细胞因与体内组织在形态结构和功能活动上存在很大的相似性,因此,在基础及临床研究中极为重要。

  人气管上皮细胞分离自气管组织;气管(Trachea),呼吸器官的一部分;为后壁略平的圆筒型管状。上端平第六颈椎下缘,与环状软骨相连;向下至第四、五胸椎体(相当胸骨角平面)交界处,分左、右主支气管,分叉处称为气管杈。气管主要由14-16个半环状软骨构成,有弹性,软骨为“C”字形的软骨环,缺口向后,各软骨环以韧带连接起来,环后方缺口处由平滑肌和致密结缔组织连接,保持了持续张开状态。管腔衬以粘膜,表面覆盖纤毛上皮,粘膜分泌的粘液可粘附吸入空气中的灰尘颗粒,纤毛不断向咽部摆动将粘液与灰尘排出,以净化吸入的气体。

  人气管上皮细胞传代方法:

  收到细胞后,取出培养瓶在倒置显微镜下观察细胞生长情况:

  如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,吸出培养液,加新的10ml培养液在瓶内继续培养。

  如果细胞已长满,即可进行传代培养。具体步骤如下:

  1.弃去培养液,用PBS(不含钙,镁离子)洗1-2次。

  2.加0.5ml消化液(0.125%Trypsin-0.25mM EDTA)于培养瓶中,倒转放于37度培养箱1-3分钟预热,然后又将培养瓶倒转过来大约30秒后,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆分散,轻敲几下培养培养瓶,细胞随即脱落下来。

  3.加入6-8mlDMEM+10%FBS培养液或1-2ml胰酶抑制剂,吸入离心管,离心(1000转,6分钟),弃上清,加10mlLHC-8将细胞重悬,分到新的培养瓶中。一传二或三。

  注:1、观察细胞最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行,否则不能准确判断细胞的传代密度。

  2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基,细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。

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