给大家讲一个笑话：某小师妹跟着师兄做细胞冻存实验，复制粘贴了每个步骤，结果复苏的时候还是死了一大片。好笑吗？哈哈哈，可是你们为什么要哭啊...

  对于很多科研汪来说，细胞是最脆弱又重要的宝贝之一，承担着重要的实验数据希望。尤其是在冻存复苏的时候，经常会因为一些小细节导致问题。比如：

  风水

  出各种玄学状况的时候，污染物是毋庸置疑的源头，培养室的空气、培养箱内循环的空气、培养箱的层架以及显微镜的载物台和物镜都可能是污染源。还有就是你自己，进入无菌间后尽量不要说话，进入无菌间后尽量不要说话，进入无菌间后尽量不要说话。打开培养箱后绝对不能说话，打开培养箱后绝对不能说话，打开培养箱后绝对不能说话。

  不要对着它念叨，要用你的心去感化细胞，重要的事情说三遍。

  温度

  慢冻快融是细胞冻存复苏的核心关键词之一。常见的是-4℃→-20℃至-40℃→-80℃→液氮，有着严格的梯度降温。

  目前更多使用程序降温盒，将细胞冻存管放于盒内，之后再置于超低温冰箱，程序降温盒可控制每分钟下降1℃，一定要避免温度原因导致细胞自取灭亡；除非使用了成分经过优化、经过严格测试的冻存液，才能免去程序降温这个繁琐的步骤。保存的时候也要保证整个细胞都是处于液氮的液面下方，避免温度对细胞存活的影响。

  水土

  解冻后的细胞要用和以前一样的培养液和血清。因为每一种细胞都有自己特定的，并且已经熟悉了的生长环境。突然使用不一样的培养液和血清，会造成细胞生长不良，甚至死亡。这和一个人突然离家千里，会水土不服是一样的道理。

  除了操作中的各种小细节，还有一个实验雷区，就是配制细胞冻存液。常见的冻存液配制要遵循培养基+血清+DMSO的成分要求，根据细胞实际判断成分配比，还建议使用程控仪，注意配制温度，一个不小心就又会影响细胞的存活效果。所以今天，小秋给各位养细胞的科研汪们带来一款细胞神器——HAKATA无血清细胞冻存液。

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