293T[HEK-293T](人胚肾细胞)是293[HEK-293]细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株。该细胞广泛应用于病毒包装，因其比较容易转染，也是常用的表达研究外源基因的细胞株。

           

                            图1. 293T正常生长图片

  该细胞因为贴壁松散，若购买常温细胞，收货时有可能大部分细胞脱离培养瓶壁，显微镜下找不到细胞，只能看到肉眼可见的细胞团，是正常现象（如图2）。

          

                  图2. 293T收货聚团（仅供学习参考）

  参照以下方式处理即可恢复正常：

  1、收到细胞后请先置于培养箱中稳定2~4h后再进行下一步处理，不建议放置培养箱过夜后处理；

  2、将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，1200rpm离心3min收集细胞；

  3、去掉上清，用PBS重悬细胞（以手摇离心管的方式重悬，不要用移液枪吹），将细胞收集到一个离心管中，再次1200rpm离心3min；

  4、去掉上清，加入1mL左右0.25%胰酶重悬细胞（还是以手摇离心管的方式混匀，不要吹细胞）,放入培养箱消化2min；

  5、消化2min后，加入5mL完全培养基混匀终止消化，用移液枪轻轻吹打细胞悬液，使细胞团分散，1200rpm离心3min；

  6、去掉上清，加入6mL左右细胞相应的完全培养基混匀，视细胞量决定是1:2传代还是1:3传代（由于细胞运输有损伤，首次传代建议比平时养密度稍高）；

  7、显微镜下观察细胞是否有分散成单颗现象，若有明显很大的细胞团需要重复上述步骤二次消化；

  8、第二天及时观察细胞贴壁情况，若贴壁细胞量过多，造成细胞堆积，贴壁24h后再次传代分瓶，若密度正常则继续生长，不建议换液，贴壁48h后换液去掉不能贴壁的细胞。

  培养注意事项

  细胞贴壁松散，操作时应轻拿轻放；

  培养时可将培养瓶/皿进行包被；

  PBS润洗时动作应缓慢，避免冲走细胞；

  细胞传代第二天可能有轻微聚团现象，再长一天能长开，不建议传代第二天换液，以免损失细胞。

  智立中特（武汉）生物科技有限公司主要致力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用，围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求，探索、发现、收集国内外的微生物资源，妥善长期保存管理；在保证生物安全和保护知识产权的前提下，为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。旗下质粒载体网是一款提供质粒载体展示及定制的专业型网站，由智立中特（武汉）生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造！主要展示了各种基因类型下的质粒载体！

  我们的工作主要包括：广泛分离、收集、保藏、交换和供应各类微生物质粒菌种；保存用于专利程序的各种可培养生物材料；质粒载体类保藏技术研究；微生物分离、培养技术研究；微生物鉴定和复核技术研究；保藏菌种的资料情报收集和提供及编辑微生物菌种目录。