为了保持在体外培养过程中的肿瘤细胞的稳定性，以及保留其重要的生物学特征，必须建立一套有效的肿瘤细胞保种和体外传代培养体系。本文将就肿瘤细胞体外传代培养及保种的概念、意义、方法及注意事项进行综述。

一、肿瘤细胞体外传代培养及保种的概念和意义

肿瘤细胞体外传代培养及保种是指在体外无血清环境中，通过一定的技术手段将肿瘤细胞进行传代培养，以增加细胞数量并保持其生物学特征的方法。这种方法的建立对于研究肿瘤细胞的生物学特性、药物筛选、基因功能鉴定以及肿瘤治疗药物的研发等方面具有重要意义。

首先，通过肿瘤细胞体外传代培养及保种，可以获得大量具有代表性的肿瘤细胞样本，用于进行各种实验研究。其次，通过深入了解肿瘤细胞的生物学特性，有助于寻找潜在的治疗靶点，为肿瘤治疗提供新的思路和方法。此外，建立稳定的肿瘤细胞系还有助于药物筛选和功能基因组学的研究，为抗肿瘤药物的研发提供有效平台。

二、肿瘤细胞体外传代培养及保种的方法

肿瘤细胞体外传代培养及保种的方法可分为常规培养方法和特殊培养方法两种。

1. 常规培养方法

常规培养方法主要包括细胞贴壁培养和细胞悬浮培养两种。细胞贴壁培养是肿瘤细胞体外传代培养中最常用的方法之一，其原理是将肿瘤细胞接种于固体培养基表面，通过贴壁生长而形成单层细胞，然后在适宜的条件下进行传代培养。细胞悬浮培养则是将肿瘤细胞悬浮于培养液中，使其生长成球形或形成单细胞悬液，再进行传代培养。

2. 特殊培养方法

特殊培养方法包括三维细胞球培养、干细胞培养和基因工程改造等方法。三维细胞球培养是一种模拟体内细胞生长状态的体外培养方法，通过将肿瘤细胞接种于可溶性支架材料上，使其在三维空间中形成具有球形结构的细胞团块，再进行传代培养。干细胞培养则是将肿瘤细胞在模拟体内微环境的条件下进行长期培养，以获得具有干细胞特性的细胞系，再进行传代培养。基因工程改造则是利用基因转染、基因敲除等技术手段对肿瘤细胞进行遗传修饰，以增加其适应性和生存能力，再进行传代培养。

三、肿瘤细胞体外传代培养及保种的注意事项

在进行肿瘤细胞体外传代培养及保种时需要注意以下几点：

1. 掌握合适的接种密度：接种密度过低会影响细胞的生长和繁殖速度，过高则可能导致细胞过度竞争营养物质而死亡，因此需要掌握合适的接种密度。

2. 注意环境因素的控制：肿瘤细胞的生长和繁殖受到多种环境因素的影响，如温度、湿度、pH值、氧气浓度等，需要严格控制这些环境因素，以保证细胞的正常生长和繁殖。

3. 维持适当的营养物质：肿瘤细胞的生长和繁殖需要适当的营养物质，如氨基酸、维生素、葡萄糖等，需要根据细胞的特性和生长阶段提供适量的营养物质。

4. 避免污染：肿瘤细胞在体外培养过程中容易受到污染，如细菌、支原体等，需要采取有效的措施避免污染的发生。

5. 做好记录：在进行肿瘤细胞体外传代培养及保种的过程中需要做好详细的记录，包括细胞的生长状态、传代次数、冻存时间等信息，以便于后续的分析和研究。

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