在免疫学、肿瘤学和传染病学等领域，人淋巴细胞分离液是不可或缺的实验工具。这种基于密度梯度离心原理的溶液，能快速从复杂的人外周血中分离出高纯度的淋巴细胞，为后续的细胞培养、免疫表型分析和功能实验提供基础。

一、了解人淋巴细胞分离液

人淋巴细胞分离液，也称为淋巴细胞分离介质（Lymphocyte Separation Medium, LSM），是一种根据血细胞密度差异设计的密度梯度离心溶液。

它的密度被精确调配在1.077±0.001g/mL范围内，与人淋巴细胞的密度（1.075-1.090g/mL）相近，而区别于红细胞、粒细胞的密度（约1.090g/mL）和血小板的密度（1.030-1.035g/mL）。

这种分离液主要由聚蔗糖400（Ficoll 400）和泛影酸钠（Sodium diatrizoate）按特定比例混合而成。

聚蔗糖构成溶液的主体密度，而泛影酸钠则提供适当的渗透压（280-340mOsm/kg H2O）和pH值（7.0-7.5），保持细胞在分离过程中的活性。

一般的人淋巴细胞分离液多是无菌过滤溶液，内毒素水平极低（≤0.5EU/ml），适用于对细胞培养要求严格的实验环境。

Absin人淋巴细胞分离液（#abs930）

二、分离原理揭秘

人淋巴细胞分离液的工作机制基于密度梯度离心原理，巧妙地利用了不同血细胞之间存在的自然密度差异。

当稀释后的抗凝全血轻轻铺在分离液上层并进行离心时，不同密度的血细胞会在离心力作用下在分离液中重新分布：

• 最上层：密度最小的血浆和血小板（密度约1.030g/mL）
• 第二层：淋巴细胞和单核细胞（密度1.075-1.090g/mL）集中在血浆与分离液交界处，形成环状乳白色层（常称为“白膜层”）
• 第三层：透明的分离液本身
• 最底层：密度最大的红细胞和粒细胞（密度约1.090g/mL）

这种分层现象使得研究人员能够轻松地获取高纯度的淋巴细胞群体。

根据产品性能数据，使用人淋巴细胞分离液获得的淋巴细胞纯度通常大于90%，细胞存活率超过90%，提取率约为80%左右。

三、主要应用领域

人淋巴细胞分离液在生物医学研究中应用广泛，是许多实验的起点。

四、实验操作指南

掌握正确的操作方法对获得高质量的淋巴细胞至关重要，以下是主要步骤：

操作中的关键注意事项：

• 温度控制：分离液和样本需保持在18-25℃的环境中。温度过低会导致分离液密度升高，可能造成红细胞污染；温度过高则会使密度降低，影响淋巴细胞回收率。
• 稀释液选择：不可使用含Ca、Mg离子的缓冲液，这些离子会引起血细胞凝集，降低细胞得率和纯度。
• 离心管材质：部分塑料制品（如聚苯乙烯）因静电作用可能导致细胞挂壁，推荐使用聚丙烯离心管或未经碱处理的玻璃离心管。

五、常见问题与解决方案

即使按照标准流程操作，实验中仍可能遇到各种问题，以下是常见问题及解决方法：

• 离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层：通常原因是转速过小或离心时间过短，可适当增加转速。
• 离心后目的细胞存在于分离液中：这可能是因为转速过大或离心时间过长，可适当减低转速。
• 离心后白膜层弥散：往往是由于细胞密度过大，可适当调整细胞密度。
• 离心后白膜层太浅或看不见：这是因为细胞密度过小，同样需要调整细胞密度。
• 淋巴细胞回收率低：检查血液新鲜度，陈旧血液分离效果差；确保使用无静电离心管；优化离心条件。
• 红细胞污染严重：可能是分离温度过低，需确保实验在20℃左右进行；避免吸取时带入下层液体。

最后，人淋巴细胞分离液看似简单，却是连接宏观血液样本与微观细胞世界的桥梁。掌握了它的工作原理和使用技巧，就等于掌握了开启免疫细胞研究大门的钥匙。

在CAR-T细胞治疗等前沿领域，这一传统技术仍在为革命性医疗突破提供基础支持。

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