罗丹明123

Rhodamine 123 是一种可对活细胞线粒体染色的细胞染色试剂。罗丹明123可透过细胞膜且在活细胞的线粒体内聚集，并发出黄绿色荧光。罗丹明123广泛用作检测线粒体膜电位，也常用于细胞凋亡检测。由于细胞内ATP的量与罗丹明123的荧光强度之间有相关性，此荧光染料被应用于检测细胞内的ATP。

罗丹明123的最大激发波长为507nm，最大发射波长为525nm。在荧光显微镜下观察，呈现黄绿色荧光。

使用方法（仅供参考）

工作液配制 

用缓冲液或者预热的培养液直接稀释储存液到需要的工作液浓度（1～20 µM），充分混匀。具体的工作液浓度使用者要根据自身实验体系进行调整。

【注意】：对于细 胞实验，要控制好总体稀释倍数，DMSO 在培养液中的浓度不能超过 0.1%，以避免 DMSO 对细胞的影响。 

荧光显微镜观察 

1）用载玻片准备细胞。细胞数目应为 5×10⁴～5×10⁵个/mL。 

2）在载玻片上孵育细胞，用 PBS 或 HBSS 洗涤细胞。 

3）将 Rhodamine 123 工作液加入载玻片并在 37℃下孵育 30 min 至 1 小时。 

4）去除 Rhodamine 123 溶液并用培养液洗涤细胞（洗涤细胞后如果要固定，加入 10%福尔 马林缓冲液并孵育 15～20 min，接着用 PBS 洗涤）。

5）荧光显微镜观察细胞。 

流式细胞仪分析 

1）取对数生长期的细胞，接种到孔板，过夜培养。 

2）如果要进行药物刺激，在细胞中加入感兴趣的药物进行干预，继续培养一定时间后，收集细胞，PBS 清洗 2 次。 

3）加入 Rhodamine 123 工作液重悬细胞，37℃避光孵育 15 min 或更长时间。

【注意】：由于细胞种类和实验体系不同，Rhodamine 123 工作液浓度和孵育时间可以根据预实验或参考文献自行调整。 

4）用流式细胞仪检测。

Solarbio实验案例（仅供参考）

1、取对数生长期A549细胞接于六孔板（1*106+2mlDMEM培养基）,37℃培养箱培养4-24h待其贴壁，以便后续实验操作.

2、弃掉培养液，PBS洗涤两次.

3、用培养基（无血清）稀释 Rh123母液制备 1～20µM Rh123工作液。具体工作浓度取决于细胞类型和细胞浓度。

4、将 Rh123工作液加入六孔板并在37℃下孵育 30 分钟.

5、去除 Rh123 工作液并用PBS洗涤三次细胞去除背景色.

6、荧光显微镜观察.

In Vitro

Cell（RSCs）

To document cellular migration trajectories, the cell center was identified as the midpoint between the poles of the cell body and tracked for changes in x and y positions at 5 min intervals. Using this method, RSCs morphology after 2 h was recorded via IF staining of the cytoskeleton (Rhodamine, Solarbio, China). This process was repeated for at least 50 cells per condition per experimental trial. Each experiment was conducted in triplicate.

来源文献：Luo X, Yang J, Zhao Y, Nagayasu T, Chen J, Hu P, He Z, Li Z, Wu J, Zhao Z, Duan G, Sun X, Zhao L, Pan Y, Wang X. Engineering spatially-confined conduits to tune nerve self-organization and allodynic responses via YAP-mediated mechanotransduction. Nat Commun. 2025 Jan 2;16(1):66. doi: 10.1038/s41467-024-55118-9. PMID: 39746959; PMCID: PMC11695937.

Cell（SKOV3 and SKOV3TR cells；50 μg/mL of Rhodamine 123, and incubated in the dark for 30 min）

Mitochondrial membrane potential (MMP) was detected by Rhodamine 123 staining. Briefly, SKOV3 and SKOV3TR cells were treated with various therapeutic nanocomposites for 24 h, washed with PBS twice, stained with 50 μg/mL of Rhodamine 123, and incubated in the dark for 30 min. Next, the cells were again washed with PBS twice and photographed under an inverted EclipseTE2000-U fluorescence microscope.

来源文献：Wang X, Xiong T, Cui M, Li N, Li Q, Zhu L, Duan S, Wang Y, Guo Y. A novel targeted co-delivery nanosystem for enhanced ovarian cancer treatment via multidrug resistance reversion and mTOR-mediated signaling pathway. J Nanobiotechnology. 2021 Dec 23;19(1):444. doi: 10.1186/s12951-021-01139-1. PMID: 34949180; PMCID: PMC8697442.