样本:植物、动物、全血、病毒等等
样本处理:依据实验不同处理
步骤:裂解、结合、洗涤、洗脱
结果:260/280, 260/230 电泳图
实验:
磁珠法核酸提取试剂盒采用纳米生物磁珠可选择性吸附核酸的原理进行核酸提取。
本试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,从样品中分离纯化高质量基因组DNA,特殊包被的磁珠,在一定条件下对目的DNA具有很强的亲和力,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,能够达到快速分离纯化DNA的目的。整个过程不涉及有毒试剂,安全、便捷、提取的DNA纯度高。使用本试剂盒纯化的基因组DNA (OD260-OD320)/(OD280-OD320)均在1.7~2.0之间,可以应用到各类下游分子生物学实验。
名称:核酸提取试剂盒(磁珠法)
规格:20T
保存条件:4℃
保质期:180天
适用范围:从人类以及哺乳动物等血液中提取基因组DNA,适用于自动化核酸提取平台。
试剂盒组成:
Buffer A Buffer B 磁珠 洗涤液Ⅰ 洗涤液Ⅱ 洗脱液 使用说明书
注意事项:
1. Buffer B 4℃保存,可能会析出白色粉末状沉淀,使用前混合均匀,不影响使用效果。
2.磁珠用前一定要充分混匀。
3.如果同等取样量下欲得到更多DNA可以增加洗脱次数(洗脱次数最好不要超过3次),也可以适当延长裂解时间(最好不要超过30min)。
4.样品的处理依据各种样本的特点进行处理。
操作步骤:
1.裂解
2.结合
将EP管从温浴设备中取出,加入振荡混匀的磁珠xµl,异丙醇xµl(自备),颠倒混匀xmin。将EP管置于磁力架上进行磁分离,吸弃废液(吸净管盖及管底残液)。
3.洗涤
⑴ 加入xµl洗涤液Ⅰ,点振5~10次(若有团状或丝状物可增加点振次数及力度),然后磁分离,吸净管盖及管底的残液;
⑵ 加入xµl洗涤液Ⅱ,点振5~10次(若有团状或丝状物可增加点振次数及力度),然后磁分离,吸净管盖及管底的残液;
⑶ 重复步骤⑵一次,室温下开盖干燥5min。
4.洗脱
加入xµl洗脱液,缓慢抽吸混匀,x℃温浴xmin。每隔xmin轻摇EP管几下混匀。然后磁分离,小心吸取上清液至新
的EP管中,进行下游实验。
常见问题分析
常见问题 可能的原因 建议
得率低 取样前没有充分混匀样品 每次取样前充分混匀样品,使白细胞均匀的悬浮于样品中
结合不充分 结合过程中要使磁珠一直处于悬浮状态,结合时间严格按照说明书
裂解不充分 样品粘稠度高或白细胞数目多容易造成裂解不充分,减少样品用量
样品中白细胞含量太低 将样品低速离心,取白细胞层50µl,其他试剂用量严格按照说明书操作
样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整 严格按照说明书操作,如果需要增大样本量,可以等比例增大Buffer A、Buffer B以及磁珠用量,其他试剂用量可以不改变(但是要适当延长裂解时间)
无扩增条带或扩增条带不亮 TE影响扩增 用Tris将双蒸水pH调至8,代替TE洗脱
用双蒸水代替TE洗脱,但没有调节pH 用Tris将双蒸水pH调至8,代替TE洗脱
血液粘稠度高,晾干时间短 延长晾干时间
洗脱液颜色发黄 洗涤过程不充分 如果结合后磁珠呈团状、丝状或颗粒状,要增加点震力度及次数
裂解不充分 样品粘稠度高或白细胞数目多容易造成裂解不充分,减少样品用量
样品用量大于说明书给出量而其他试剂用量没有相应调整 严格按照说明书操作,如果需要增大样本量,可以等比例增大Buffer A、Buffer B以及磁珠用量,其他试剂用量可以不改变(但是要适当延长裂解时间)