凝胶法miRNA分离试剂盒价格,详情介绍-960化工网

凝胶法miRNA分离试剂盒

价格：￥1

品牌：xuanya

产地：中国/美国

最新更新日期：2021-07-01 17:09

我要询单 QQ交流

上海烜雅生物科技有限公司

我要认领

公司：上海烜雅生物科技有限公司

联系人：黄经理

联系电话： 18701994219 021-62457717

联系邮箱：1517347860@qq.com

QQ： 1517347860

产品属性

保存条件

常温运输和保存

保质期

两年

英文名	One-Stop Column miRNAOUT

数量

100

供应商	上海烜雅生物科技有限公司

规格

50 次

产品说明

凝胶法miRNA分离试剂盒产品及特点：
本产品是在烜雅miRNAout基础上自主开发的柱式升级产品，是目前国内外市场上最快速最简单的小RNA分离纯化产品。它具有下列特点：
1. 一步法直接分离纯化小RNA，比两步法（先分离总RNA和再纯化其中的小RNA）和PAGE电泳回收法更简单。得到的小RNA长度大部分在200nt以下，包括5S RNA、tRNA、miRNA、Pre-miRNA、pri-miRNA、siRNA、shRNA和snRNA等。
2. 柱式操作，比miRNAout更加简单快捷，整个过程只需要十多分钟。
3. 适用范围广，可以用于动物组织、血液及部分植物组织等实验材料。
4. 小RNA纯净，OD260/280一般都在1.9以上。
5. 产率一般为20-40ug/100mg动物组织。
6. 无基因组DNA的污染。
7. 可用于RT-PCR、miRNA标记、microarray等后续实验。

凝胶法miRNA分离试剂盒运输及保存：
常温运输和保存，有效期一年。
自备试剂：氯仿。

凝胶法miRNA分离试剂盒使用方法
由于离心吸附柱的吸附量限制，本产品每次提取只能处理 100mg 左右的各种组织，可以在 1.5 mL 塑料离心管中。如果处理样品量大，请分成很多相当于微量提取的量进行，最后再收集在一起。
1. 新鲜配制裂解液。将溶液 A 和溶液 B 按 1:1 的比例混合，然后根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用。注意：溶液 A 和溶液 B 混合后必须立即使用，不要放置，否则会产生沉淀。
a) 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每 10 平方厘米细胞中加入 1 mL 新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b) 对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106悬浮细胞中加入1 mL新鲜配制的裂解液，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1 mL 新鲜配制的裂解液的细胞使用量不要超过 1×106个细胞。
凝胶法miRNA分离试剂盒c) 对新鲜的动物或植物实体组织：匀浆法：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入 10 mL 或 15 mL 塑料离心管中，每 50-100 mg 组织加 1 mL 新鲜配制的裂解液，用剪切式匀浆机匀浆 30 秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的 DNA），建议组织的使用量不要超过 50 mg/ mL 裂解液，否则十分容易产生 DNA 污染。液氮研磨法：将组织在液氮中研磨成粉，然后转移到新配制的裂解液中，震荡混匀。
d) 对在 RNALOCKER等非冻型保存液中保存的动物或植物实体组织组织：先用纸吸去 RNALOCKER液体后再剪切成小块，再按新鲜实体组织的处理方法处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的 1.5 mL 塑料离心管中，然后加入 0.2 倍体积的自备氯仿(1 mL 裂解物需 0.2 ml 氯仿)，振荡器上充分振荡混均 30 秒。
3. 12000-15000 g 室温离心 3-5 分钟。
4. 将上清液（约 0.6-0.8 mL）转移到广口的离心吸附柱中。注意：离心后下层有机相和中间层含有 DNA 和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和 DNA 污染。为保险起见，可以留下 100 uL 上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状 DNA。不要使用专门吸附小 RNA 的窄口离心吸附柱。
5. 12000-15000 g 室温离心半分钟，收集管中的穿透液。大 RNA 及 DNA 将与离心吸附柱的膜结合，小 RNA 将存在于穿透液中。但由于离心吸附柱的最大吸附能力为 40 ug 动物 RNA，20 ug 植物 RNA，所以如果样品中的大 RNA 含量高于上面数值，则需要减少上样量，否则穿透液中将同时含有大 RNA 和小 RNA。如果不减少上样量，也可以将穿透液再次重复上柱以去除大 RNA。由于此时离心吸附柱已经吸附了大 RNA，所以需要提前对离心吸附柱进行预处理（具体步骤见本手册最后的附录）。
6. 在最后得到的不含大 RNA 的穿透液中加等体积的溶液 C，混匀。此时溶液的总体积约 1.5 mL。
7. 先转移约 0.75mL 到窄口的离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
8. 将上步上柱剩余的样品转移到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。
9. 加 0.7mL miRNA 专用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。
10. 加 0.3mL miRNA 专用洗柱液到离心吸附柱中，12000-15000 g 室温离心半分钟，弃穿透液。此步一般可以省略。
11. 12000-15000 g 室温离心半分钟以甩出残联液体。此步十分重要，否则残留的 miRNA 专用洗柱液会影响 miRNA 的使用。
12. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free收集管中，加入30-50uL RNA 洗脱液，室温放置 3-5 分钟。
13. 12000-15000 g 室温离心半分钟，离心管中溶液即为 miRNA 样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

凝胶法miRNA分离试剂盒附录：宽口离心吸附柱反复上样去除大 RNA 的流程
1. 将结合有大RNA和DNA的宽口离心吸附柱中加入0.1mL自备的超纯水, 12000-15000 g 室温离心半分钟，弃收集液。
2. 再加 0.1mL 自备的超纯水，重复上步一次。
3. 将第 5 步的得到、需要进一步去除其中大 RNA 和 DNA 污染的穿透液直接上柱，12000-15000 g 室温离心半分钟，收集穿透液（此穿透液含小 RNA）。
4. 如果大 RNA 已经去干净，可以直接进入第 6 步。一般样品只需要额外处理一次就可以去除全部的大 RNA 污染。

凝胶法miRNA分离试剂盒相关产品：

周细胞生长因子

滋养层细胞生长因子

荧光探针及示踪剂

5(6)-CFDA

5(6)-TRITC

5-Carboxyfluorescein

5-Carboxyfluorescein succinimidyl ester

5-FITC

Acridine Orange(AO)

Actin-Tracker Green( 微丝绿色荧光探针 )

BCECF AM

Calcein

Calcein Blue

Calcein M

CFDA SE ( 细胞增殖示踪荧光探针 )

Congo Red

Cyanine 3-NHS Ester

Cyanine 5-NHS Ester

DAF-FM DA(NO 荧光探针 )

Dansyl chloride