本试剂盒可测各种动物血清（浆）中微量游离血红蛋白含量。血浆游离血红蛋白（plasma free hemoglobin，FHb），指测定血浆中血红蛋白的量。通常血红蛋白存在于红细胞中，当红细胞破坏，血红蛋白释放。游离血红蛋白含量的测定用于反映溶血性贫血病人血中红细胞破坏情况。血浆游离血红蛋白增多，见于血管内溶血，珠蛋白生成障碍性贫血、自身免疫性溶血性贫血。

测定原理：
血红蛋白分子中亚铁血红素具有类过氧化酶活性，催化H₂O₂释放新生态氧[O]，[O]使酚以及4-AAP氧化生成红色物质，颜色深浅与Hb含量成正比。

试剂盒特点：

• 快速简便：全程约50分钟。


• 取样量微：本法取样本量150μL。


• 再现性好：变异系数CV=1.7%。


• 回收试验：X =102%。


• 受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。


• 检测范围宽：3.6～200mg/L

试剂盒组成：

组分	规格
试剂一	80mL
试剂二	80mL
试剂三	50mL

保存：2～8℃，有效期6个月

所需仪器及自备试剂：

• 可见分光光度计（比色测定波长为510nm）


• 恒温水浴箱或气浴箱（孵育温度为37℃）


• 漩涡混匀器


• 微量移液器

操作步骤：

• 显色剂配制：
  按试剂一:试剂二:试剂三＝20:20:1比例，现配现用，用多少配多少。


• 按下表加入各个成分

  成分	测定管	空白管
  血清(浆)	0.15mL
  ddH2O		0.15mL
  显色剂	2.5mL	2.5mL



• 混匀，37℃水浴20分钟，510nm，1cm光径，双蒸水调零测定各管OD值


• 计算公式：
  游离血红蛋白(mg/L)＝126.03×(测定OD值－空白OD值)＋3.5041
  注：根据标准曲线拟合计算公式计算

计算举例：
取正常人不溶血血浆150μL，测游离血红蛋白含量，按步骤操作，测得空白管OD值为0.008，测定管OD值为0.17。则计算结果为：

游离血红蛋白(mg/L)	＝126.03×(测定OD－空白OD)＋3.5041
	＝126.03×(0.17－0.008)＋3.5041
	＝23.921mg/L

附录：标准曲线制作

• 测定标准品OD值
  用FHb标准稀释液将血红蛋白标准品稀释成6个梯度的浓度：20mg/L、40mg/L、80mg/L、120mg/L、160mg/L、200mg/L，按步骤操作测定空白管及每个标准管的OD值


• 数据处理

  标准浓度(mg/L)	测定OD	绝对OD
  0	0.006	0
  20	0.117	0.111
  40	0.271	0.265
  80	0.622	0.616
  120	0.945	0.939
  160	1.247	1.241
  200	1.559	1.553



• 绘制标准曲线：