| 病毒 RNA 提取试剂盒 |
| RNApureVirusKit |
| 离心柱式 |
| Cat No:DY6174 |
| Kit Size:50T |
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| 产品组分 | | | | | | | |
| | 组分 Contents | | | 50preps | | |
| | Buffer 1# | | | 15ml | | |
| | Buffer 2# | | | 40ml | | |
| | Buffer(concentrate) 3# | | 11ml | | |
| | Buffer 4# | | | 10ml | | |
| | Buffer 5# | | | 1ml | | |
| | 离心管 | | | | 50 | | |
| | 吸附柱 | | | | 50 | | |
| | 收集管 | | | | 50 | | |
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| 储运条件 | | | | | | | |
| 本试剂盒中Buffer 5# -20℃保存，其他组分室温15℃-25℃干燥条件保存。 |
| 说 明 | | | | | | | |
| 本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途。 | | |
| 产品简介 | | | | | | | |
| 本试剂盒采用可以特异性结合病毒 RNA 的吸附柱和独特的缓冲液系统，适用于从血清、血浆、尿液、脑脊液等无细胞体液及细胞培养上清液中分离病毒 RNA。病毒 RNA 特异性地结合到硅基质膜上，而污染物则流过该膜。通过两次高效洗涤完全去除蛋白质等杂质，然后用无 RNase 的水或试剂盒提供的 Buffer 4# 洗脱高纯度的病毒 RNA。由本试剂盒提取的病毒 RNA 可直接用于 RT-PCR、Real-timeRT-PCR 和印迹分析等实验。 |
| 实验前准备及注意事项 | | | | | | |
| 1. 需要自备试剂：无水乙醇、0.9%NaCl |
| 2. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。 |
| 3. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4h，塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10min，用水彻底冲洗后高压灭菌。 |
| 4. 配制溶液应使用无RNase的水。 |
| 5. 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。 |
| 6. 血清或血浆避免反复冻融导致蛋白变性或产生沉淀，减少病毒滴度,会影响提取病毒核酸的产量。 |
| 北京德元国际科技有限公司 |
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| 7. 第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在 Buffer3# 中加入无水乙醇。 |
| 8. Buffer1# 如果产生沉淀，可在 56℃加热使其溶解后室温放置。 |
| 9. 所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。 |
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| 操作步骤 | |
| 1. 室温下取200 μl 血清或血浆加到1.5ml离心管（自备）中。 |
| 注意：不足200 μl可以加入0.9%NaCl（自备）补足。 |
| 2. 向上步溶液中加入20 μlBuffer 5#，混匀。 |
| 3. 加入200 μlBuffer1#，涡旋震荡15s。 |
| 注意：不要直接把Buffer 5#加到Buffer1#中。 |
| 4. 56℃ 孵育15min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。 |
| 5. 加入250 μl 无水乙醇，涡旋震荡15s，室温孵育5min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。 |
| 6. 将步骤 5 得溶液全部加入到吸附柱（吸附柱应预先装入收集管中）中，若一次不能将全部溶液加入吸附柱中，请分两次转入，8,000rpm（~6000×g）离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 |
| 7. 向吸附柱中加入500 μlBuffer 2#，8,000rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 |
| 8. 向吸附柱中加入500 μlBuffer3#（使用前检查是否加入无水乙醇），8,000rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 |
| 9. 向吸附柱中加入500 μl 无水乙醇，8,000rpm 离心 1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 |
| 10. 12,000rpm(~13,400×g)离心3min，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。 |
| 注意：1）这一步的目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR 等）。 |
| 2）推荐步骤：将吸附柱放入一个新的1.5ml离心管（自备）中，打开管盖，56℃烘箱孵育3min，使吸附柱的膜彻底干燥。 |
| 11. 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-50 μlBuffer4#，室温放置5min，12,000rpm离心1min，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。 |
| 注意：1）Buffer4#体积不应小于20 μl，体积过小影响回收率。 |
| 2）如果要提高RNA的产量，可用20-50 μl新的Buffer4#重复步骤11。 |
| 3）如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤11。 |
