DNA甲基化定量检测试剂盒（比色法）
介绍
产品特性：在使用DNA甲基化定量检测试剂盒（比色法）检测全基因组DNA甲基含量时是非常适 合的.不论是从哺乳类动物,植物,真菌,细菌,病毒和培养细胞,新鲜与冷冻的组织,石蜡包埋组 织,血浆/血清样本,体液样本. 此品尤其适合仅有少量样品在激光显微捕获了的解剖样品和 胚胎.
DNA输入量： 每次DNA的上样量为50 - 200ng。最优DNA的输入量为100 ng,在某些种属中甲基化的 DNA一般都小于1%的总DNA。
材料包括各种组织或细胞试样如细胞培养瓶或酶细胞、新鲜和冷冻组织,石蜡包埋组织、 血浆/血清样品,体液样品等. 内控: 此品包含有阳性与阴性DNA对照。一个标准曲线可以进行(范围:1－ 10 ng)或单个数量的甲基化的DNA可以作为阳性对照。因为全基因组甲基化是从组织到组织, 从正常和病变的区域,建议确保运行复制样品信号的生成是经过验证的。这个工具可以让用 户以量化的绝对数量或相对数量来确定甲基化的DNA。
预防措施：为了避免交叉污染,小心样品或溶液的加入。在使用移液器加入不同液体样本时，要及 时更换枪头。在整个实验程序中需要戴手套。且不同样品之间的接触,立即更换手套
一般特性: 质控: 每批DNA甲基化定量检测试剂盒（比色法）的生产,对既定的各个组件的生产把控,确保 了稳定的产品质量。保证所有产品的性能描述都符合行业的产品标准。
产品概述： DNA 甲基化定量检测试剂盒(比色法)中含有定量检测全基因组甲基化所必需的所有试 剂。在检测实验中，DNA 被固定在一种有 DNA 吸附能力的孔上，甲基化的片段会被捕获剂 以及检测抗体识别，用酶标仪读取在 450 nm 处的 OD 值来定量。甲基化的 DNA 的量与 OD 值成线性关系，可以通过本试剂盒提供的方程来计算两种不同的甲基化 DNA 样品的相对甲 基化状态或者通过标准曲线完全定量 5-mc。基于其工作原理和微孔板模式，本试剂盒可以 用于各种物种来源的多种样品形式，包括培养的细胞、新鲜和冷冻的组织、石蜡包埋组织、 血浆/血清样品以及体液样品。
关于 5-hmC 5-hmC 是近年来在动物组织中发现的，由胞嘧啶修饰而来。5-hmC 在表观遗传学上的功 能可能与 5-甲基化胞嘧啶(5-mC)不同。尽管到现在为止还不确知其功能，有研究者猜测它在 调控基因的表达与关闭过程中起着重要的作用。5-mC 的发现让我们不得不重新评估 DNA 甲 基信息，也不得不监测人类的健康组织和病理组织之间 5-mC 相对分布的差异。在我公司的 DNA 羟甲基化定量检测技术之前，我们还没有发现任何直接的常规方法来检测 5- hmC,以及 区分 5-hmC 和 5-mC。
5-hmC 和 5-mC 的区别 时下常用的 DNA 甲基化分析方法包括限制内切酶酶切和亚硫酸氢盐后的定性定量分析 或 MeDIP 介导的 MS-PCR 和测序，这些技术都不适合用来检测 5-hmC，因为它与 5-mC 事实 上很难用这类方法区分开来。为了解决这个问题，我司特研制了 DNA 羟甲基化定量检测试 剂盒(荧光法)。本试剂盒提供了一种很经济的方法来检测 5-羟甲基化胞嘧啶，并且区分 5-hmC, 5-mC, 和 C，使得研究者能够重新评估他们的 DNA 甲基化信息，也能够在新样品中寻找 DNA 羟甲基化。 最近，一种新的修正的核苷酸被命名为：5-hmC,且在老鼠的大脑和胚胎干细胞中已经发 现。在1952年，5-hmC第一次发现是在噬菌体内。在哺乳动物中，它是由甲基化胞嘧啶氧化 所产生的，这是一个通过T族酶和DNA甲基转移酶蛋白介导的一个反应 。下面是胞嘧啶的甲 基化、羟甲基化形式：
未甲基化 DNA 甲基化 DNA 羟甲基化 DNA T-C-G-T-C-G-A-C-G T-mC-G-T-mC-G-A-mC-G T-hmC-G-T-hmC-G-A-hmC-G
试剂盒曾经对来自小鼠大脑和海拉细胞系的样品成功地进行了 5-hmC 的定量，所得到的结 果与用 HPLC 和 LC-MS 的方法相当。通过使用本试剂盒，研究者们首次在正常人类脑部组织 和结肠组织中发现了高丰度的 5-hmC。同时，研究结果还显示，正常人类脑部组织和结肠组 织中 5-hmC 分别占总甲基化胞嘧啶(5-mC 和 5-hmC 的总和)的 32%和 16%。相反，在结肠癌 细胞系(HCT116)和宫颈癌细胞系(HeLa)中，5-hmC 的比率很低，几乎没有。 96 孔板模式让您可以根据自己的需要选择用手工或者高通量；此试剂盒中提供通用阳 性和阴性对照，能用于定量检测各种来源的 DNA 样品中的羟甲基化状态，包括哺乳动物、 植物、真菌、细菌以及病毒；此试剂盒中含有定量检测全基因组 DNA 羟甲基化实验所有用 到的试剂，包括阳性和阴性对照。直接测定荧光强度的方法来进行定量检测取代了已过时的 和劣质的方法，无须 DNA 消化/变性、提取，不用使用套色版，不接触放射性材料；本品用 到的新方法和专利试剂使得羟甲基化 DNA 定量实验结果精确、高度灵敏特异，检测极限为 10 pg 的羟甲基化 DNA，检测范围宽至 10 pg 到 20 ng，检测灵敏度是 HPLC 的十倍(0·008% vs 0·08%)，不与 DNA 上甲基化或者未甲基化胞嘧啶反应，特异检测 5-hmC。
1) 5-mC转化到 5-hmC大大降低蛋白质的亲和力对于甲基化 DNA； 2) 5-hmC 群系通过氧化损伤或借助外源的醛式的 DNMTs 能够防止参与的 DNMT 目标胞 嘧啶不被甲基化 3) 5-hmC可能会吸收特异性的蛋白，并致使染色质的结构发生改变或 DNA 甲基化模式的 改变 4) 5-hmC分布在 40%的甲基化胞嘧啶的蒲金耶氏细胞（Purkinje cells）中,有 10%在颗粒 神经元（granule neurons）中.
本试剂盒有以下优点和特性： l 整个比色法检测技术的操作简单易学，方便快捷，只需要 4 小时就能完成实验； l 灵敏度高,检测极限低至 0.2 ng 甲基化的 DNA； l 对于未甲基化和甲基化的胞嘧啶无特异性,仅对甲基化 DNA（5-mC）进行高度专一的检 测; l 通用型的阳性与阴性对照,对于任何种属的甲基化 DNA 状态进行定量检测是非常理想 的； l 无论对于手动还是高通量分析,微孔板（96 孔）的设计使实验更灵活； l 简单、可信和检测实验条件恒始终如一。
原理/程序: DNA甲基化定量检测试剂盒(比色法)包含全基因组 DNA 甲基化定量的所有试剂。在此实验 中，DNA必定会跑出经过处理后的具有高亲和性的DNA条带。在检测实验中，DNA被固定在 一种有DNA吸附能力的孔上，甲基化的片段会被捕获剂以及检测抗体识别，然后使用酶标仪 测出 450 nm 处的吸光值，对其进行比色法定量。甲基化的DNA的量同测量的OD值成比例。
