人外周血淋巴细胞分离液说明书

本品用于分离人外周血淋巴细胞（FICOLL配制）

【包装规格】

200ml/瓶

【货号】

LTS1077-1

【适用仪器】

最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机

【检验方法】

全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。

通用实验方法

• 取 2ml 新鲜抗凝血与 2ml 样本稀释液（产品编号：2010C1119）混匀。

• 取一支 15ml 离心管，加入 3ml 分离液，用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液之液面上，400g，30-40min。

• 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

• 取白环层，加入 3 倍体积的清洗液（产品编号：2010X1118）混匀，60-100g，离心 10min，弃上清。

• 加 6-8ml 清洗液（产品编号：2010X1118）混匀，60-100g，离心 10min，弃去上清，后

以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬目的细胞。

注：血液样品量增大时，可通过改变离心管直径的方法始终保持样本量高度与分离液高度为

2.4cm 与 3cm，其他分离条件不变。

为满足客户实际使用需求，根据不同血液样本量推荐具体实验操作方法如下：

一、 使用 15ml 离心管时：

情况 A：血液样本量小于 3ml 时，实验方法如下：

• 取一支 15ml 离心管，加入 3ml 分离液。

• 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，400-650g，离心 20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。

• 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴

细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

• 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

• 250g，离心 10min。

• 弃上清。

• 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

• 250g，离心 10min。

• 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

情况 B：血液样本量为 3-6ml 时，实验方法如下：

• 取一支 15ml 离心管，先加入与血液样本等量的分离液。

• 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，450-650g，离心 20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过 1200g）。

• 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

• 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

• 250g，离心 10min。

• 弃上清。

• 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

• 250g，离心 10min。

• 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

二、 使用 50ml 离心管时：

情况 A：血液样本量为 6-10ml 时，实验方法如下：

• 取一支 50ml 离心管，先加入与血液样本等量的分离液。

• 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，500-950g，离心 20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过 1200g）。

• 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴

细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

• 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

• 250g，离心 10min。

• 弃上清。

• 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

• 250g，离心 10min。

• 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

情况 B：血液样本量为 10-20ml 时，实验方法如下：

• 取一支 50ml 离心管，先加入与血液样本等量的分离液。

• 用吸管小心吸取血液样本加于分离液之液面上，500-1100g，离心 20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果，但最大离心力最好不超过 1200g）。

• 离心后，此时离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。

• 用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞层到另一 15ml 离心管中，向所得离心管中加入 10ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。

• 250g，离心 10min。

• 弃上清。

• 用吸管以 5ml 清洗液（产品编号：2010X1118）重悬所得细胞。

• 250g，离心 10min。

• 重复 6、7、8，弃上清后以 0.5ml 后续实验所需相应液体重悬细胞。

【注意事项】

• 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，最好在取血 2h 内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。

• 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

• 吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。

• 吸取过多的淋巴细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。

• 如所实验后细胞得率或活性过低，请联系上海研谨生物技术人员以寻求帮助。

• 当血液样本粘度过高需稀释时，最优稀释方法：将血液与样本稀释液（产品编号：2010C1119）1:1 稀释混匀备用。注：不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。如血液样本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。

• 因血液样本的个体差异及血液粘度不同，需调整离心力及离心时间，离心力最大不超过

1000g。

【储存条件及有效期】

常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启

封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。

【参考值（参考范围）】

本实验淋巴细胞提取率及纯度均大于 80%。

下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。

红细胞

白细胞

血小板

（4.0-10.0）×109

（4.0-5.5）×1012

（1.0-3.0）×1011

含量（个/L）

中性粒细胞

淋巴细胞

单核细胞

50%-70%

20%-40%

3%-8%

【新型离心管最佳实验技术方案】

抗凝血液

稀释液

分离液

离心力

离心时间

15mL 离心管

3mL

3mL

约 4mL

（与隔片持平）

400-500g

4mL

/

（最大不超过

20-30min

10mL

10mL

约 15mL

50mL 离心管

1000g）

15mL

/

（与隔片持平）

【相关实验技术方案】

• 所获得淋巴细胞的培养技术。

• 所获得淋巴细胞的核酸提取技术。